항원으로 코팅된 커버슬립(Coverslip)을 이용한 B 세포 활성화

B 세포 활성화는 면역 반응을 유도하기 위해 표면의 B 세포 수용체인 BCR에 의한 항원을 인식하는 것을 포함합니다.

시험관 내에서 B 세포 활성화를 연구하려면 고분자 물질 위에 고정된 항원 및 항-CD45R 항체가 포함된 커버슬립으로 시작합니다. 음전하를 띤 항원과 항체는 정전기 상호 작용을 통해 커버슬립의 양전하를 띤 폴리머와 상호 작용합니다.

코팅된 커버슬립을 B 세포가 포함된 배지로 오버레이하고 배양합니다. B 세포의 막관통 단백질인 CD45R은 고정된 항체와 상호 작용하여 세포 접착을 촉진합니다.

부착된 B 세포의 BCR은 항원과 상호 작용하여 세포 신호 전달 및 항원 내재화를 위한 조정 영역인 면역 시냅스를 형성합니다. 이는 세포골격 리모델링을 촉진하고 세포 확산을 시작하여 항원과 접촉하는 세포 표면을 증가시킵니다.

추가 리모델링은 BCR 결합 항원이 면역 시냅스의 중심을 향해 이동하게 합니다. 이 세포 재배열은 리소좀을 포함한 세포 내 소기관을 시냅스 쪽으로 안내하는 시냅스막 근처의 중심체의 재배치를 유발합니다.

리소좀과 막의 융합은 항원-BCR 복합체의 내재화로 이어집니다. 내재화된 항원은 펩타이드 단편으로 처리되어 클래스 II 주요 조직적합성 복합체 또는 MHC 분자에 로드되고 최종적으로 활성화된 B 세포에 제시됩니다.

PBS에 항-BCR 및 B220을 각각 mL당 10마이크로그램 및 7.5마이크로그램의 최종 농도로 첨가하여 항원 용액을 준비합니다. 다음으로, 파라핀 필름으로 덮인 24웰 플레이트의 뚜껑 위에 커버슬립을 놓고 40마이크로리터의 항원 용액을 추가합니다. 플레이트를 밀봉한 다음 밤새 4도에서 배양합니다.

커버슬립에서 활성화를 시작하려면 먼저 PBS로 세척하고 몇 분 동안 건조시키십시오. 다음으로, 150,000개의 B 세포를 추가하고 서로 다른 시점에 대해 37도에서 배양합니다. 두 경우 모두 비드 또는 항원 코팅 슬라이드로 활성화할 때 가장 긴 시점부터 시작한 다음 더 짧은 시점으로 진행하는 것이 좋습니다.