Name: Isı Şoku Yöntemiyle E. coli içine Plazmid DNA Dönüşüm (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-08-01T00:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 46 s
Description: Öğrenin, ısı şoku yöntemiyle E. coli'ye plazmid DNA dönüşümünü nasıl gerçekleştireceğinizi. Bu teknik, moleküler biyoloji ve genetik mühendisliği çalışmalarında temel bir yöntemdir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

isı Şoku yöntemiyle e. coli içine plazmid dna dönüşüm

Transformation of Plasmid DNA into E. coli Using the Heat Shock Method

Dönüşüm ısı şok yöntemi kullanılarak E. coli içine plazmid DNA moleküler biyolojinin temel bir tekniktir. Bu bakteri yabancı bir plazmid veya ligasyonu ürün ekleme oluşur. Bu video protokolü Genlantis piyasada bulunan kimyasal yetkili bakteri kullanarak dönüşüm geleneksel yöntem açıklanır. Buz kısa bir inkübasyondan sonra, 45 saniye boyunca 42 ° C&#39;de kimyasal yetkili bakteri ve DNA karışımı konur (ısı şok) ve ardından buz geri yerleştirilir. SOC medya eklenir ve dönüştürülmüş hücreleri ile 37 ° C de 30 dakika süreyle ajitasyon inkübe edilir. Dönüşüm verimliliği bağımsız koloniler izole emin olmak için, iki miktarlarda dönüştürülmüş bakteri kaplanmıştır. Bu geleneksel protokol ticari olarak satılan birçok yetkili bakterileri dönüştürmek için başarıyla kullanılabilir. Genlantis turbocells bir roman 3 dakika dönüşüm protokolü, kullanım kılavuzunda açıklanan de kullanılabilir.

Isı Şoku Yöntemiyle E. coli içine Plazmid DNA Dönüşüm

Isı şoku yöntemi kullanılarak plazmit DNA'nın E. coli'ye transformasyonu, moleküler biyolojinin temel bir tekniğidir. Bu işlem, yabancı bir...

Merhaba, ben Alex Hoge. University of California Irvine Fizyoloji ve Biyofizik Bölümü'ndeki Gym Hall Laboratuvarı'nda çalışıyorum. Bugün size, elektroporasyon yöntemiyle elektriksel olarak kompetan e coli transformasyonunun nasıl yapılacağını göstereceğim.Bugün, zebrafishlerde bütün montaj hibridizasyonu yapmak için hazırladığım ligasyon ürünümle bir E. coli transformasyonu gerçekleştireceğim. Tamam, transformasyon işlemine başlıyoruz. Öncelikle, su banyonuzun veya kuru banyonuzun 42 °C'ye ayarlanmış olması gerekir.Ana stoktan yeni çıkardığınız bakterilerin buz üzerinde olması gerekir. Bugün, buz üzerindeki elektrokompetan hücreleri ve DNA'nızı kullanacağız. Ayrıca, oda sıcaklığında veya 37 °C'de bir tüp SOC besiyerine ve antibiyotikli LV plaklarınıza ihtiyacınız olacaktır.Şimdi DNA'yı bakterilerle birleştireceğim. Bakterileri kontamine etmemek için alevin yanında çalışıyorum. Böylece bakterilerin bulunduğu solüsyonu ekliyorum.50 µL bakteri ekleyin ve ardından hemen tekrar buza yerleştirin; bakterileri ve DNA'nızı karıştırmak için tüpleri hafifçe sallayabilirsiniz ve 15 dakikaya kadar buzda bekletin. Şimdi 15 dakika geçti ve bakterileri 42 °C'de 45 saniye boyunca tutacağımız ısı şo

transformation-of-plasmid-dna-into-e-coli-using-the-heat-shock-method

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Tüm plazmid Site directed mutagenesis özgün bir plazmid biraz farklı varyasyonlarını oluşturmak için basit bir yoludur. Burada temel yerine plazmid kullanarak standart reaktifleri tanıtmak için kolay ve maliyet etkin bir şekilde göstermektedir.

Tüm Plazmidler Homemade Sitesi Yönetmen Mutagenez

Kaynak: Erdoğan, F., ve diğerleri, Bakteriyel Konjugasyonda Yer Alan Transfer Proteinlerinin Diziye Özgü Analizi için Konjugatif Çiftleşme Deneyleri. J. Vis. Uzm. (2017)Bu video, bir kurtarma plazmidi kullanarak bir F plazmitinin donörden alıcı E. coli hücrelerine aktarılması ve ikili antibiyotik direnci yoluyla transkonjuganların seçilmesi prosedürünü göstermektedir. İşlem, bakteri kültürlerinin karıştırılmasını, çalkalanmadan inkübasyonu, çiftleşme çiftlerinin bozulmasını ve başarılı plazmit...

E. coli'de F Plazmid Transferi ve İkili Antibiyotik Seçimi

Kaynak: Stefan, A., ve diğerleri, Escherichia coli'de Protein Birlikte Ekspresyonunun Çok Yönlü Faydaları. J. Vis. Uzm. (2015)Bu video, hücre hazırlama, elektroporasyon, geri kazanım ve transformantların seçimi dahil olmak üzere Escherichia coli'yi antibiyotik direnç geni taşıyan bir plazmit ile dönüştürme prosedürünü göstermektedir.

Yüksek Voltajlı Elektroporasyon Kullanılarak Bakterilerin Hazırlanması ve Dönüşümü

Bu protokol, ısı şoku proteini 70'in (Hsp70) şaperon aktivitesini gösterir. E. coli dnaK756 hücreleri, doğal, işlevsel olarak bozulmuş bir Hsp70 barındırdıkları için test için bir model görevi görür ve bu da onları ısı stresine duyarlı hale getirir. Fonksiyonel Hsp70'in heterolog girişi, hücrelerin büyüme eksikliğini kurtarır.

Isı Şoku Proteininin Şaperon Fonksiyonunu İncelemek için Escherichia coli Bazlı Tamamlama Testi 70

Bu makale, bir C41 (DE3) ekspresyon sisteminde toksik bir nükleaz olan rekombinant Nsp15'in aşırı eksprese edilmesi için bir metodolojiyi ve ardından afinite ve boyut dışlama kromatografisi kullanılarak etiketli proteinin saflaştırılmasını açıklamaktadır. Bu protokoller diğer zorlu toksik proteinler için uyarlanabilir.

Escherichia coli'den Toksik Bir Nükleazın Aşırı İfade Edilmesi ve Saflaştırılması

Plazmid DNA Qiagen Miniprep Kit kullanarak Bakteri kolonileri Arındırıcı

Bu çalışma kromozomal düzeyde bir RNA / DNA hibrid formu ve maya hücreleri genomik DNA, RNA genetik bilginin transferi ortaya nasıl gösterir.

RNA içeren Oligonükleotidler kullanarak Dönüşüm Genomik DNA, RNA / DNA Hibritlerin Üretimi

Biz, iki boyutlu agaroz-jel analizi, UV ışını meydana çoğaltma ara yapısını tanımlamak için kullanılır olabilir bir prosedür sunuyoruz.

UV ile indüklenen Çoğaltma Ara Görselleştirme E. coli İki boyutlu agaroz-jel Analizi

Bu protokol, verimli paralel açıklama ve plazmid DNA arıtma için uygun maliyetli bir...

Prokaryotik Kültürler itibaren Plazmid DNA Aerodinamik Arıtma

Burada, belirli bir hedef dizisi için, rastgele bir mutant kütüphane oluşturmak için basit bir protokol göstermektedir. Escherichia coli, in vivo olarak yapılan bu yöntem, yeni enzimatik faaliyetleri gelişmeye fonksiyonel seçimleri ile birleştiğinde nasıl kullanılabileceğini göstermek.

Proteinlerin Yönetmen Evolution Mutagenez ve Fonksiyonel Seçim Protokolleri E. coli</em

Öğrenin, ısı şoku yöntemiyle E. coli'ye plazmid DNA dönüşümünü nasıl gerçekleştireceğinizi. Bu teknik, moleküler biyoloji ve genetik mühendisliği çalışmalarında temel bir yöntemdir.

Isı Şoku Yöntemiyle E. coli içine Plazmid DNA Dönüşüm

Daha fazla video keşfet