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Imagens ao vivo de cálcio celular Combinado com siRNA silenciamento gênico mediado Identifica Ca 2 + Canais de vazamento na membrana ER e seus mecanismos de regulação
JoVE 신문
생물학
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JoVE 신문 생물학
Live Cell Calcium Imaging Combined with siRNA Mediated Gene Silencing Identifies Ca2+ Leak Channels in the ER Membrane and their Regulatory Mechanisms

Imagens ao vivo de cálcio celular Combinado com siRNA silenciamento gênico mediado Identifica Ca 2 + Canais de vazamento na membrana ER e seus mecanismos de regulação

DOI:
10.3791/2730-v

•

13:40 min

•

July 07, 2011

•

, , ,
1Medical Biochemistry and Molecular Biology,Saarland University, 2Experimental and Clinical Pharmacology and Toxicology,Saarland University

Chapters

  • 00:05Title
  • 02:16Preparation of Stock Solutions
  • 03:03Gene Silencing in HeLa Cells
  • 05:39Complementation of HeLa Cells
  • 07:07Live Cell Calcium Imaging
  • 09:58Representative Calcium Imaging Results
  • 12:58Conclusion

Summary

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O retículo endoplasmático desempenha um papel fundamental na biogênese de proteínas e na homeostase do cálcio. Nós estabelecemos um sistema experimental que nos permite abordar o papel dos canais de Ca2 + de vazamento e para caracterizar o suposto mecanismos de regulação. Este sistema envolve siRNA silenciamento gênico mediado e de células vivas Ca2 + imagem.

Tags

Live Cell Calcium ImagingSiRNA Mediated Gene SilencingCa2+ Leak ChannelsER MembraneRegulatory MechanismsEndoplasmic ReticulumProtein BiogenesisCalcium SignallingHeterotrimeric Sec61 ComplexNascent PolypeptidesPuromycinER Luminal Protein BiPExperimental SystemCoding RegionUntranslated Region (UTR)SEC61A1 GeneComplementation AnalysisIRES-GFP Vector

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