A. mesenterica samentrekking en ontspanning Studies met behulp van geautomatiseerde Wire Myography

Deze procedure maakt gebruik van zoutgevoelige en zoutresistente ratten om de reactiviteit van mesenteriale resistentiearteriën onder phenylephrine-spanning ten opzichte van extracellulair calcium te vergelijken. Dit wordt bereikt door eerst de mesenteriale arcade uit de dieren te isoleren en de vertakkingen van de resistentiearterie te dissekeren. Vervolgens wordt één van de twee roestvrijstalen draden door een kort segment van de gedisseceerde arterie geregen en wordt het vat in de grafiekkamer gemonteerd.

Vervolgens wordt de tweede roestvrijstalen draad parallel aan de eerste draad door het lumen van het vat geregen. Daarna wordt het gemonteerde vat uitgerekt tot een genormaliseerde interne omtrek. De laatste stap van de procedure is het reactiveren van het vat door het bloot te stellen aan herhaalde toedieningen van fenylefrine en het te laten ontspannen met cumulatieve toedieningen van calcium.

Uiteindelijk tonen de resultaten veranderingen in de spanning van het vat aan, die kunnen worden omgezet in een calciumresponscurve en kunnen worden gebruikt om EC 50-waarden te bepalen. Ter vergelijking: we kregen voor het eerst het idee om deze methode te gebruiken toen we ontdekten dat het neurale netwerk van ratten-Masonary-batterijen een gpro-gekoppelde calciumsensorreceptor tot expressie bracht.

Dit kan op dezelfde manier worden bestudeerd als bittere AIC-receptoren, die worden geactiveerd door een agonist. Over het algemeen kunnen personen die nieuw zijn met deze methode problemen ervaren omdat de endotheel- en gladdespierlagen klein zijn. Vaten raken gemakkelijk beschadigd.

Als dit gebeurt, kunnen de mechanische eigenschappen van deze vaten worden aangetast. Bereid eerst de werkruimte en de chirurgische instrumenten voor. Plaats een geanestheseerd dier op de rug en veeg de buik af met alcohol.

Voer een midline laparotomie uit en gebruik een schaar om ongeveer 85 centimeter van de darm te verwijderen, inclusief de arteria mesenterica superior. Snijd het proximale uiteinde dicht bij de pylori door en het distale uiteinde nabij de ileocecale overgang. Plaats het weggesneden segment in een gecoate Petrischaal met fysiologische zoutoplossing of PSS bij kamertemperatuur.

Zet het proximale uiteinde van de darm aan de rechterkant vast met een speld en spel daarna de rest van de darm in tegenwijzerzin vast. Dissekeer vervolgens een segment van de arteria mesenterica dat vertakking twee en drie bevat, samen met een stuk darm vanaf het proximale uiteinde. Identificeer het V-vormige vertakkingspunt van de arteria mesenterica en dissekeer dit weg van de vene.

Gebruik een pincet om vet- en bindweefsel voorzichtig weg te trekken om direct contact met de slagader te vermijden. Om het vat te monteren, snijdt u twee slagadersegmenten van ongeveer twee millimeter lang. De punt van een vier centimeter lange, 40 micrometer wolfraamvrije roestvrijstalen draad kan worden gebruikt om het lumen van de slagader te openen.

Gebruik vervolgens een fijne pincet om de draad in het lumen van elke slagader in te brengen. Vul de myo-graftkamer met PSS bij 37 °C, waarbij u er zorg voor draagt het endotheel niet te beschadigen. Gebruik een pincet om het segment van het vat met de draad naar de kamer over te brengen.

Breng vervolgens het weggesneden proximale vaatsegment over naar de myografiekamer en trek het uiteinde langs de draad om het in het vat te voeren. Vermijd het uitrekken van het vat. Bevestig het nabije uiteinde van de draad tegen de klok in onder de nabije bevestigingsschroef op de rechterbek die verbonden is met de micrometer.

Pak het vrije uiteinde van de draad met een pincet en bevestig deze met een draai in klokrichting onder de verste bevestigingsschroef op de rechterbek; zorg ervoor dat het vaatsegment langs de draad in de opening tussen de bekken is gesitueerd zonder contact te maken met de bek zelf. Draai de bekken uit elkaar. Lijn de tweede draad parallel aan het vat uit en voer deze in aan het verre uiteinde van het lumen.

Voer de draad voorzichtig in één beweging door het lumen van het vaatsegment, met de reeds gemonteerde draad als geleider. Houd de draad ongeveer één centimeter van het vat af om uitrekking tijdens de manoeuvre te voorkomen en vermijd contact met het endotheel. Draai de kaken in elkaar en zorg ervoor dat de tweede bevestigingsdraad onder de eerste draad doorloopt, die aan de rechterzijde is vastgezet.

Bevestig het nabije uiteinde van de tweede draad in een directionele beweging met de klok mee onder de nabije bevestigingsschroef van de linkerbek die verbonden is met de transducer. Bevestig het verre uiteinde van de draad onder de bevestigingsschroef op de linkerbek en draai deze aan om de draad te spannen. Zodra de montage is voltooid, laat het systeem 30 minuten equilibreren bij 37 °C.

Na de equilibratie wordt de motor gereset via het montage-menu en wordt de normalisatieprocedure gestart, waarbij het vat wordt uitgerekt tot een genormaliseerde interne omtrek. Open om te beginnen het normalisatiemenu en stel de doelsleuvel voor de transmurale druk in op 13.3 kilopascals. Stel vervolgens de duur van elke normalisatiestap in op 60 seconden.

De verhouding tussen IC one en IC 100 moet 0,9 zijn en de IP-kalibratie moet worden ingesteld op two star delta. Meet de lengte van de gemonteerde mesenteriale arterie met behulp van de oculairaflezingen van de microscoop wanneer de haarlijnen zich boven de uiteinden van het vaatsegment bevinden. Na normalisatie worden de vaten gereactiveerd door een standaard start uit te voeren, bestaande uit een reeks stimulaties en uitwasperioden.

Vervang eerst de afdekking van de myochamber en start de beluchting met 95% lucht en 5% koolstofdioxide. Vul de kamer met verse PSS die 100 µM ascorbinezuur bevat. Contracteer het vat gedurende vijf minuten met 5 µM fenylefrine (PE) en was vier keer met PSS-buffer. Vul de kamer na de laatste wasbeurt opnieuw met PSS en wacht drie minuten voordat u de kamer opnieuw vult met PSS en contracteert met PE. Zoals eerder aangetoond, is de arterie nu klaar voor het experiment.

Meet de relaxatie van gecontracteerde vaten door cumulatief toenemende concentraties calciumchloride toe te voegen. Deze tabel laat zien dat de basale spanningen na toediening van fenylefrine varieerden tussen Wistar DS of doll zoutgevoelige en DR of doll zoutresistente ratten. Deze trace van een Wistar-rat toont de relaxatie van door PE gecontracteerde arteriën door cumulatieve toevoegingen van calcium; de relaxatie is ernstig beperkt in weefsels van DS-ratten vergeleken met Wistar-ratten en vergeleken met DR-ratten. Zoals hier te zien is, kunnen de verschillen in calciumsensitiviteit worden waargenomen in de calciumresponscurves en opnieuw bij het berekenen van de EC 50-waarden.

Ten slotte vertonen DS-ratten een vermindering in de expressie van de calciumsensingreceptor in slagaders vergeleken met Dr.Rats. Eenmaal beheerst, kan deze techniek in twee uur worden uitgevoerd indien correct uitgevoerd. Na het bekijken van deze video zou u een goed begrip moeten hebben van hoe de vasculaire reactiviteit van kleine enterische arteriën op exogene verbindingen onder isometrische omstandigheden kan worden vergeleken.