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Visualisation protéines et de complexes macromoléculaires par EM négatif Tache: de la préparation de grille pour l'acquisition d'images
JoVE 신문
생체공학
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JoVE 신문 생체공학
Visualizing Proteins and Macromolecular Complexes by Negative Stain EM: from Grid Preparation to Image Acquisition
DOI:

08:01 min

December 22, 2011

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Chapters

  • 00:05Title
  • 01:16Making Carbon Coated EM Grids for Negative Staining EM
  • 02:28Carbon Coating Grids
  • 04:27Preparing Negative Stain EM Grids
  • 05:57Preparing an Electron Microscope
  • 07:07Electron Microscopy Images
  • 07:30Conclusion

Summary

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Visualisation des échantillons de protéines par microscopie électronique à coloration négative (EM) est devenue une méthode d'analyse structurelle populaires. Il est utile pour l'analyse structurelle quantitative, comme le calcul d'une reconstruction 3D des molécules étudiées, et aussi pour un examen qualitatif de la qualité des préparations de protéines. Dans cet article nous présentons des protocoles détaillés pour la préparation des grilles EM, la coloration de l'échantillon et la visualisation de l'échantillon dans un microscope électronique. Les utilisateurs novices peuvent suivre ces protocoles à utiliser facilement et négatifs EM tache comme un test de routine, en plus d'autres dosages biochimiques, pour évaluer leurs échantillons de protéines.

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