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Visualizzazione proteine ​​e complessi macromolecolari di Negative EM Stain: dalla preparazione alla griglia Image Acquisition
JoVE 신문
생체공학
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JoVE 신문 생체공학
Visualizing Proteins and Macromolecular Complexes by Negative Stain EM: from Grid Preparation to Image Acquisition
DOI:

08:01 min

December 22, 2011

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Chapters

  • 00:05Title
  • 01:16Making Carbon Coated EM Grids for Negative Staining EM
  • 02:28Carbon Coating Grids
  • 04:27Preparing Negative Stain EM Grids
  • 05:57Preparing an Electron Microscope
  • 07:07Electron Microscopy Images
  • 07:30Conclusion

Summary

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Campioni di proteine ​​di visualizzazione negativo microscopia elettronica macchia (EM) è diventato un metodo popolare di analisi strutturale. È utile per l'analisi quantitativa strutturale, come ad esempio calcolare una ricostruzione 3D delle molecole in fase di studio, e anche per l'esame qualitativo della qualità della preparazione delle proteine. In questo articolo presentiamo protocolli dettagliati per la preparazione delle griglie EM, colorazione del campione e visualizzando il campione in un microscopio elettronico. Gli utenti meno esperti possono seguire questi protocolli in modo semplice e di utilizzare negativo EM macchia come un test di routine, oltre ad altri saggi biochimici, per valutare i loro campioni di proteine.

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