Modelo do rato de endometriose cirurgicamente induzida pela Auto-transplante de tecido uterino

O objetivo geral deste procedimento é induzir cirurgicamente a endometriose em camundongos por transferência autóloga de tecido uterino para a cascata arterial da membrana intestinal. Isso é feito primeiro ligando, removendo e expondo o endométrio do útero. A segunda etapa do procedimento é criar três implantes endometrioides a partir do endométrio exposto usando um punção de biópsia de dois milímetros.

A terceira etapa do procedimento é suturar os três implantes endometrioides nas artérias da cascata arterial do mesentério intestinal. A etapa final do procedimento é fechar a parede abdominal e a pele e permitir que o animal recupere as lesões endometrioides. Extirpados de camundongos se assemelham aos de mulheres com endometriose, conforme determinado por análise histológica e padrões de expressão gênica e proteica.

Geralmente, os indivíduos novos nesse método terão dificuldades por três razões principais. Primeiro, os tecidos do camundongo são muito pequenos. Em segundo lugar, o mesentério intestinal é facilmente danificado e, em terceiro lugar, as suturas, se colocadas com muita força, resultarão em necrose intestinal.

Comece reunindo todo o equipamento cirúrgico necessário para uma cirurgia asséptica bem-sucedida, incluindo soluções para analgesia e anestesia. Após anestesiar o animal com isoflurano inalatório, confirmar a anestesia completa por resposta negativa a um estímulo de pinça do dedo do pé para evitar o ressecamento durante a cirurgia, aplicar pomada oftálmica nos olhos e raspar o local da cirurgia com uma pequena tesoura. Desinfete o local da cirurgia com três toques alternados de clorexidina e etanol a 70% e, em seguida, cubra o animal com um campo estéril.

Faça uma pequena incisão na linha média usando uma tesoura pequena ou uma lâmina de bisturi terminando 0,5 a 1,0 centímetros rostral à abertura vaginal. Suavemente rombudo, disseque a parede do corpo da parede abdominal para facilitar o fechamento do local da cirurgia. Após a dissecção romba, faça uma pequena incisão na linha média na parede abdominal.

Em seguida, usando uma pequena pinça, localize suavemente o chifre uterino esquerdo. O útero é dorsal ao intestino, que é o que normalmente é visível ao entrar pela primeira vez no local da incisão, puxe suavemente o chifre uterino e deslize uma pinça aberta por baixo dele para servir como afastador. Também é útil observar a aparência dos ovários e do útero neste momento.

Para ajudar na datação do ciclo estral. Deslize dois, seis a oito centímetros pedaços de cinco suturas de seda trançada preta sob o chifre uterino esticado. Ligue com segurança o chifre na junção do túbulo utero.

Basta mimar a trompa de Falópio e na junção cervical do útero. Usando um nó quadrado em cada local, deixe as pontas da sutura sem cortes. Corte a seção do corno uterino entre as duas ligaduras e coloque o tecido em uma placa de Petri de vidro contendo aproximadamente 100 microlitros de PBS contendo penicilina e estreptomicina.

Corte as pontas da sutura de seda por último. Se a sutura se soltar ou houver sangramento, encontre o coto e dê outro nó ou não usando uma tesoura pequena. Retire a gordura do corno uterino.

Abra o corno uterino inserindo uma lâmina de uma pequena tesoura no lúmen. Deslize suavemente a tesoura pelo chifre uterino enquanto segura o chifre com uma pinça Na placa de Petri de vidro, use um punção de biópsia de dois milímetros para cortar três implantes de tamanhos iguais. Certifique-se de evitar que sequem.

Coloque gaze estéril imediatamente acima do local da incisão e molhe completamente com PBS estéril contendo penicilina e estreptomicina. É importante manter a hidratação durante as etapas seguintes com pinças pequenas e lisas. Encontre suavemente o ceco e mova-se ao longo do intestino delgado.

Puxe uma pequena seção de quatro a cinco centímetros do intestino e arrume-a como um leque na gaze pré-umedecida para que a cascata arterial do mesentério intestinal seja claramente visível. Certifique-se de manter o intestino úmido o tempo todo com solução salina estéril. Coloque um implante em uma agulha e, em seguida, use seis suturas aut black alon para prender suavemente o implante a uma artéria a aproximadamente 0,5 centímetros do intestino.

Use apenas um. Jogue sobre a pinça e não aperte a sutura com muita força. Como isso pode resultar em perda de fluxo sanguíneo e subsequente necrose do intestino.

Complete dois nós com um, jogue cada um e apare a sutura dentro de dois milímetros do implante, hidrate o intestino. Em seguida, movendo-se na direção rostral. Retire os próximos três a quatro centímetros do intestino e substitua suavemente a seção que já contém um implante.

Pule uma ou duas artérias do local do implante anterior e suture a próxima repetição do implante para o terceiro implante. Por fim, suture a parede abdominal e feche a pele com clipes de ferida. Depois de fechar o local da cirurgia e administrar analgésicos, coloque o lado ventral do animal para baixo na gaiola, parcialmente em cima de uma almofada de água aquecida recirculante até que o animal esteja recuperado.

Para recuperar as lesões endometrioides, localize as suturas pretas no mesentério intestinal. Meça o comprimento e a largura de cada lesão endometrioide usando paquímetros. Disseque as lesões endometrioides, tomando cuidado para não lancetá-las.

Remova qualquer tecido não endometrioide da lesão. Agite as três lesões endometrioides cheias de líquido antes de remover a sutura. Remova suavemente a sutura e lance duas das lesões endometrioides.

Pese-os novamente antes de prosseguir com o processamento de tecidos. Em seguida, extirpar e pesar o corno uterino restante A análise histológica da endometriose em mulheres e no modelo de camundongo mostrado aqui indica que a lesão endometrioide contém glândulas endometriais e estroma As lesões endometrióticas em camundongos também contêm macrófagos carregados de hemossiderina, que são uma característica comum da endometriose em mulheres. As lesões endometrioides removidas de camundongos três dias após a indução parecem inflamadas e hemorrágicas, conforme mostrado à esquerda, após duas a quatro semanas de crescimento.

As lesões endometrióticas no modelo de camundongo são cheias de líquido semelhantes a cistos e cercadas por aderências peritoneais em comparação com o peso da lesão na indução. As lesões cheias de líquido foram 306% e 862% maiores e as lesões lance foram 51% e 172% maiores em um e dois meses após a indução, respectivamente. Lesão endometrioide cheia de líquido e de rapaz.

Os pesos permanecem consistentes um mês após a indução em cinco experimentos diferentes Após este procedimento. Este modelo pode ser usado para responder a perguntas sobre a fisiopatologia da endometriose e para explorar novas terapêuticas para o tratamento da dor e infertilidade associadas a esta doença.