This content is Free Access.
Chapters
- 00:05Title
- 01:30Transfection
- 02:20Cell Lysis
- 03:30Binding to Rabbit IgG-agarose
- 04:53TEV Protease Cleavage
- 05:48Binding to Immobilized Streptavidin Beads
- 07:50Biotin Elution of the Streptavidin Binging Peptide and Bait Protein
Тандем аффинной очистки является надежным подходом для идентификации связывания с белками партнеров. В качестве доказательства концепции, эта методика была применена к хорошо характеризуется фактор инициации трансляции eIF4E к сотрудничеству осадок факторов клетки-хозяина, участвующих в инициации трансляции. Этот метод легко адаптирована к любой сотовой или вирусных белков.
Tags
Protein Interacting PartnersTandem Affinity PurificationIdentification Of Interacting ProteinsYeast Two Hybrid SystemPull Down AssaysImmunoprecipitationMass Spectrometry IdentificationDouble-affinity Tag Mediated PurificationTAPEukaryotic Translation Initiation Factor EIF4ECellular Translation Factor EIF4EEIF4F ComplexCap-dependent Translation InitiationProtein G UnitsStreptavidin Binding PeptideTobacco Etch Virus (TEV) Protease Cleavage Sequence
