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생물학

Un protocole pour l'identification des interactions protéine-protéine Basé sur 15 N marquage métabolique, immunoprécipitation, la spectrométrie de masse quantitative et d'affinité de modulation

JoVE 신문
생물학

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JoVE 신문 생물학

A Protocol for the Identification of Protein-protein Interactions Based on ¹⁵N Metabolic Labeling, Immunoprecipitation, Quantitative Mass Spectrometry and Affinity Modulation

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Un protocole pour l'identification des interactions protéine-protéine Basé sur 15 N marquage métabolique, immunoprécipitation, la spectrométrie de masse quantitative et d'affinité de modulation

DOI:

10.3791/4083-v

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14:44 min

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September 24, 2012

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Stefan Schmollinger², Daniela Strenkert², Vittoria Offeddu², André Nordhues², Frederik Sommer², Michael Schroda²

¹Max Planck Institute of Molecular Plant Physiology, ²University of Kaiserslautern

Chapters

00:05Title
02:30Cell Lysis, Crosslinking and Sample Preparation
05:22Immunoprecipitation
07:06Sample Preparation for nano-LC-MS/MS
10:50Results: HSP70B with its Nucleotide Exchange Factor CGE1
14:07Conclusion

Summary

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Nous présentons une variante de l'RAPIDE (immunoprécipitation quantitative Combiné avec Knockdown) approche qui a déjà été introduite pour distinguer entre les vraies et les fausses interactions protéine-protéine. Notre approche est basée sur 15N Marquage métabolique, la modulation des affinités interactions protéine-protéine par la présence / absence d'ATP, immunoprécipitation et spectrométrie de masse quantitative.

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