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생물학

Um protocolo para a identificação de interações proteína-proteína Baseado 15 Etiquetagem N Metabólica, imunoprecipitação, Quantitativa Espectrometria de Massa e Affinity Modulação

JoVE 신문
생물학

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JoVE 신문 생물학

A Protocol for the Identification of Protein-protein Interactions Based on ¹⁵N Metabolic Labeling, Immunoprecipitation, Quantitative Mass Spectrometry and Affinity Modulation

Um protocolo para a identificação de interações proteína-proteína Baseado 15 Etiquetagem N Metabólica, imunoprecipitação, Quantitativa Espectrometria de Massa e Affinity Modulação

DOI:

10.3791/4083-v

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14:44 min

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September 24, 2012

•

Stefan Schmollinger², Daniela Strenkert², Vittoria Offeddu², André Nordhues², Frederik Sommer², Michael Schroda²

¹Max Planck Institute of Molecular Plant Physiology, ²University of Kaiserslautern

Chapters

00:05Title
02:30Cell Lysis, Crosslinking and Sample Preparation
05:22Immunoprecipitation
07:06Sample Preparation for nano-LC-MS/MS
10:50Results: HSP70B with its Nucleotide Exchange Factor CGE1
14:07Conclusion

Summary

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Nós apresentamos uma variação da abordagem QUICK (Imunoprecipitação quantitativos em conjunto com Knockdown) que foi introduzida anteriormente para distinguir entre verdadeiros e falsos interacções proteína-proteína. A nossa abordagem é baseada 15N Marcação metabólica, a modulação da afinidade das interacções proteína-proteína com a presença / ausência de ATP, imunoprecipitação, e por espectrometria de massa quantitativo.

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