שלפוחית השתן Orthotopic גידול דגם ואת הערכת טיפול סרנה השלפוחית
July 28th, 2012
הקמת מודל orthotopic גידול בשלפוחית השתן להעריך את ההשפעות נוגדות הגידולים של סרנה נמסר intravesically וצמיחה ניטור הגידול והדמיה על ידי אולטרסאונד bioluminescent.
אנו מציגים שיטה לביסוס מודל גידול אורתוטופי בשלפוחית השתן בעכברים מדוכאי חיסון. טיפול בגידולים אלה באמצעות RNA דו-גדילי קטן המועבר תוך כלי דם וניטור הגידולים באמצעות אולטרסאונד שלפוחית השתן והדמיית ביולומינסנציה. הרדמה כללית מושרית עם איזוף מאודה, פלואור ומורחים משחת עיניים סטרילית.
לאחר מכן מניחים את העכבר במצב שכיבה, וההרדמה נשמרת עם איזוף פלואור דרך חרוט האף. לאחר מכן, יש לצנתר את העכבר. אנו משתמשים בצנתר תוך-ורידי בקוטר 24 מד כאשר המחט הוסרה.
צנתור הוא לרוב השלב הקשה והבלתי צפוי ביותר בפרוטוקול. שימון רב עם ג'לי KY וטכניקה נכונה הם המפתח לצנתור מוצלח. מוצג כאן אזור הפות של העכבר.
השופכה שוכנת ממש מתחת לקפלי הפות. לאחר השימון, מלקחיים הצנתר משמשים לאחיזה וייצוב עדין של הפות והשופכה. בתחילה, נעשה שימוש בזווית תלולה יותר של 45 מעלות כדי לזרוק את השופכה, אך ברגע שנכנסים לשופכה, נלקחת זווית רדודה יותר כדי לעבור בצורה חלקה לשלפוחית השתן.
נראה את התהליך הזה כאן. שוב, לחץ אגן עדין ליישור השופכה יכול לעתים קרובות לעזור ויש לנקוט בזהירות כדי להימנע מדחיפת חזק מדי נגד התנגדות, מכיוון שהדבר עלול להוביל לנקב בשופכה או בשלפוחית השתן. שתן שנראה כאן בתוך הצנתר מאשר מיקום זה בתוך לומן שלפוחית השתן.
לאחר מכן מוציאים שתן בתוך הקטטר בעזרת מחט הסטילט והקטטר נותר כעת במקומו. כחמישה מילימטרים של קטטר צריכים להישאר גלויים מחוץ לשופכה כך שקצה הקטטר יישאר בלומן שלפוחית השתן ולא צמוד לדופן שלפוחית השתן. אם הצנתר ממוקם רחוק מדי בקטטר, הקצה עלול להיטמע בדופן שלפוחית השתן ולמנוע זריקות.
לכל הזריקות הבאות. מזרק המועמס על מחט הסטילט מונח דרך הקטטר. זה מאפשר הזרקה של נפחים מדויקים על ידי ביטול השטח המת בתוך הצנתר וזה מייתר צנתורים חוזרים ונשנים כדי ליצור פציעת כוויה בדופן שלפוחית השתן.
10 מיקרוליטר של 0.5 מולארי כסף חנקתי מוזרקים ומניחים להם להתעכב במשך 10 שניות. חנקת הכסף יכולה ליצור משקע לבן עם שאריות שתן בתוך שלפוחית השתן. משקעים אלה וכל תמיסה שנותרה מוסרים מהצנתר.
לאחר מכן אנו ממשיכים לשטוף את שלפוחית השתן עם 100 מיקרוליטר מים סטריליים ארבע פעמים בכל פעם, ומוציאים נוזלים מהצנתר, לומן. לאחר שטיפה ראשונה זו, המשקעים הלבנים עדיין נראים בתוך הקטטר, אך עם כל שטיפה הנוזל יתבהר. עניבת משי ארבע או משמשת לחסימת השופכה וכעת אנו מוכנים להזריק את התאים הסרטניים.
התאים נטענים לתוך מזרק המחובר למחט הסטילט, והתאים מוזרקים לשלפוחית השתן. הקטטר מוסר והשופכה תישאר קשורה עם העכבר בהרדמה למשך שעתיים. במרווחי זמן מוגדרים מראש, עוקבים אחר התקדמות הגידול.
באמצעות הדמיית ביולומינסנציה in vivo, העכברים מוזרקים תחילה עם לוציפר ומצע באמצעות הזרקה תוך-צפקית. לאחר קביעת הרדמה כללית עם איזוף פלואור מאודה, העכברים מונחים במצב שכיבה בתוך מכונת ה-ivus. ביולומינסנציה נמדדת ביחידות של פוטונים לשנייה.
נוכחותם של תאי KU שבעה בתוך שלפוחית העכבר ניכרת בקלות וניתן לעקוב אחר עוצמת האור הביולוגי לאורך זמן. ניתן לעקוב אחר נוכחותם והתקדמותם של גידולי שלפוחית השתן גם באמצעות הדמיית אולטרסאונד. לאחר השראת הרדמה כללית עם איזוף מאודה, מורחים פלואור ומשחת עיניים סטרילית.
העכבר מונח במצב שכיבה על שולחן האולטרסאונד. הרדמה תחזוקתית מושגת עם איזוף פלואור דרך חרוט האף. ניתן לאבטח את רגליו האחוריות של העכבר לשולחן כדי למנוע תנועה עודפת של הגוף תוך כדי מניפולציה של בדיקת האולטרסאונד.
לאחר השלמת זה, ג'ל אולטרסאונד מוחל על חלק קו האמצע של אגן החיה. לאחר מריחת ג'ל, בדיקה של 40 מגה-הרץ מאובטחת למכשיר האחיזה ומורידה לאט לאט על גוף החיה. שלפוחית השתן נראית בקלות כמבנה היפואקואי עגול בקו האמצע.
אם בעל החיים לא עבר גירוי משמעותי לפני ההרדמה, שלפוחית השתן בדרך כלל כבר נפוחה ומצאנו שאין צורך לצנתר את העכבר כדי להשיג התנפחות שלפוחית השתן. ניתן להשיג כאן תמונות רוחביות ואורכיות. גידול נראה בקלות בתוך לומן שלפוחית השתן.
אם נמצא גידול, ניתן לשמור תמונות למדידת מידות הגידול. לאחר התבססות גידול בשלפוחית השתן, העכברים מטופלים תוך שלפוחית עם RNA קטן דו-גדילי המנוסח בננו-חלקיקי שומנים. הרדמה כללית נקבעת ושוב מורחים משחת עיניים.
לאחר מכן מניחים את העכבר במצב שכיבה ומתבצע צנתור שופכה. כפי שתיארנו קודם לכן, נעשה שימוש בתפר משי של ארבע או כדי לחסום את השופכה סביב הקטטר. בדרך כלל, שני קשרים קשורים כפי שמוצג כאן.
מזרק ריק המועמס על מחט סטילט משמש לפינוי שלפוחית השתן לחלוטין. 50 מיקרוליטר של RNA דו-גדילי קטן מוחדרים לתוך שלפוחית במינון כולל של שלושה מיליגרם לקילוגרם. לאחר מכן מסירים את המחט והצנתר.
העכבר יישאר מורדם כשהשופכה סגורה למשך שעתיים בסך הכל. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב שיטה ליצירת מודל גידול שלפוחית השתן של עכבר אורתוטופי המנטר את הגידול באמצעות הדמיה ביולומינסנציה ואולטרסאונד, וטיפול בגידול באמצעות RNA קטן המועבר תוך שלפוחית. יש כמה ניואנסים לטכניקה, שדורשת קצת תרגול, במיוחד עם הצנתור, אבל בסך הכל, זה פרוטוקול שצריך להיות ניתן לשכפול בקלות.
הייתה לנו הצלחה טובה בשתילת גידולי שלפוחית השתן בעכברים, והשפעות הטיפול ברנ"א הקטן מבטיחות מאוד. עם זאת, מה שהכי מרגש בפרוטוקול הזה הוא שבעוד שטיפלנו בעכברים עם RNA קטן, ניתן להשתמש באותה טכניקה כדי לבדוק כל טיפול תוך-שלפוחית לסרטן שלפוחית השתן.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
סקירה כללית
מאמר זה מציג שיטה להקמת מודל של גידול שלפוחית השתן אורתוטופית בעכברים עם חסינות מוחלשת. המחקר מעריך את ההשפעות האנטי-גידוליות של RNA כפול גדילי קטן המועבר דרך שלפוחית השתן תוך עקיבה אחר צמיחת הגידול באמצעות אולטרסאונד והדמיית ביולומיניסצנטית.
מרכיבי מחקר מרכזיים
תחום המדע
- אונקולוגיה
- נוירולוגיה
- אימונולוגיה
רקע
- מודלים אורתוטופיים של גידול שלפוחית השתן חיוניים לחקר סרטן השלפוחית.
- מסירה דרך שלפוחית השתן של סוכנים טיפוליים יכולה למקד גידולים ביעילות.
- עקיבה אחר צמיחת הגידול חיונית להערכת יעילות הטיפול.
- אולטרסאונד והדמיית ביולומיניסצנטיה הם טכניקות לא פולשניות להערכת גידולים.
מטרת המחקר
- להקים מודל אורתוטופי אמין של גידול שלפוחית השתן.
- להעריך את היעילות של RNA כפול גדילי שמועבר דרך שלפוחית השתן.
- לעקוב אחר צמיחת הגידול באמצעות טכניקות הדמיה מתקדמות.
שיטות ששימשו
- הופעת הרדמה כללית באמצעות איזופלואן מחוסן.
- מריחת משחה עיניים סטרילית על העכבר.
- החדרת קטטר באמצעות קטטר תוך-ורידי בגודל 24.
- עקיבה אחר צמיחת הגידול באמצעות אולטרסאונד שלפוחית השתן והדמיית ביולומיניסצנטיה.
תוצאות עיקריות
- הקמה מוצלחת של מודל אורתוטופי של גידול שלפוחית השתן.
- מסירה יעילה של RNA כפול גדילי הראתה השפעות אנטי-גידוליות.
- אולטרסאונד והדמיית ביולומיניסצנטיה סיפקו ניטור מדויק של הגידול.
- המתודולוגיה מאפשרת מחקרים נוספים על טיפולים בסרטן השלפוחית.
מסקנות
- המודל שהוקם הוא כלי ערך למחקר סרטן השלפוחית.
- מסירה דרך שלפוחית השתן של RNA כפול גדילי מראה הבטחה כגישה טיפולית.
- טכניקות ההדמיה משפרות את היכולת לנטר תוצאות הטיפול.
