Bir Ortotopik Mesane Tümörü Model ve intravezikal Sarna Tedavisinin Değerlendirilmesi

İmmün sistemi baskılanmış farelerde ortotopik mesane tümörü modeli oluşturmak için bir yöntem sunuyoruz. Bu tümörlerin intravasküler olarak verilen küçük çift sarmallı RNA ile tedavi edilmesi ve tümörlerin hem mesane ultrasonu hem de biyolüminesans görüntüleme ile izlenmesi. Genel anestezi buharlaştırılmış izof, flor ile indüklenir ve steril oftalmik merhem uygulanır.

Fare daha sonra sırtüstü pozisyona getirilir ve burun konisi yoluyla flor iziği ile anestezi sürdürülür. Daha sonra, fare kateterize edilmelidir. İğne stilesi çıkarılmış 24 gauge intravenöz kateter kullanıyoruz.

Kateterizasyon genellikle protokolün en zor ve öngörülemeyen adımıdır. KY jöle ile bol yağlama ve doğru teknik, başarılı kateterizasyonun anahtarıdır. Burada fare vulvasının alanı gösterilmektedir.

Üretra, vulvar kıvrımların hemen altında yer alır. Yağlamadan sonra, kateter forsepsleri vulva ve üretrayı nazikçe kavramak ve stabilize etmek için kullanılır. Başlangıçta, üretrayı kanüle etmek için 45 derecelik daha dik bir açı kullanıldı, ancak üretraya girdikten sonra, mesaneye düzgün bir şekilde geçmek için daha sığ bir açı alındı.

Bu süreci burada göstereceğiz. Bir kez daha, üretrayı düzeltmek için hafif pelvik basınç sıklıkla yardımcı olabilir ve dirence karşı çok sert itmekten kaçınmak için özen gösterilmelidir, çünkü bu üretra veya mesane delinmesine yol açabilir. Burada kateter içinde görülen idrar, mesane lümeni içindeki bu konumu doğrular.

Kateter içindeki idrar daha sonra stile iğnesi ile alınır ve kateter artık yerinde bırakılır. Yaklaşık beş milimetrelik kateter, üretranın dışında görünür kalmalıdır, böylece kateterin ucu mesane duvarına değil, mesane lümeninde kalır. Kateter kateterin çok içine yerleştirilirse, uç mesane duvarına gömülebilir ve enjeksiyonları önleyebilir.

Sonraki tüm enjeksiyonlar için. Stile iğnesine yüklenen bir şırınga kateterin içinden yerleştirilir. Bu, kateter içindeki ölü boşluğu ortadan kaldırarak doğru hacimlerin enjeksiyonuna izin verir ve mesane duvarında yanık yaralanması oluşturmak için tekrarlanan kateterizasyonları gereksiz kılar.

10 mikrolitre 0.5 molar gümüş nitrat enjekte edilir ve 10 saniye bekletilir. Gümüş nitrat, mesane içinde artık idrar ile beyaz bir çökelti oluşturabilir. Bu çökelti ve kalan herhangi bir çözelti kateterden çıkarılır.

Daha sonra mesaneyi her seferinde dört kez 100 mikrolitre steril su ile yıkamaya devam ediyoruz ve kateter lümeninden sıvıyı alıyoruz. Bu ilk yıkamadan sonra, beyaz çökelti kateter içinde hala görülebilir, ancak her yıkamada sıvı daha berrak hale gelecektir. Üretrayı tıkamak için dört oh ipek kravat kullanılır ve şimdi kanser hücrelerini enjekte etmeye hazırız.

Hücreler stile iğnesine bağlı bir şırıngaya yüklenir ve hücreler mesaneye enjekte edilir. Kateter çıkarılır ve üretra iki saat boyunca anestezi altında fare ile bağlı kalacaktır. Önceden belirlenmiş aralıklarla, tümör ilerlemesi izlenir.

İn vivo biyolüminesans görüntüleme kullanılarak, farelere önce intraperitoneal enjeksiyon kullanılarak Lucifer ve substrat enjekte edilir. Buharlaştırılmış flor ile genel anestezi sağlandıktan sonra, fareler ivus makinesi içinde sırtüstü pozisyonda yerleştirilir. Biyolüminesans, saniyede foton birimleriyle ölçülür.

Fare mesanelerinde KU yedi hücresinin varlığı kolayca görülebilir ve biyolüminesan yoğunluğu zaman içinde takip edilebilir. Mesane tümörlerinin varlığı ve ilerlemesi ultrason görüntülemesi ile de izlenebilir. Buharlaştırılmış izof ile genel anestezi indüklendikten sonra flor ve steril oftalmik merhem uygulanır.

Fare, ultrason masasına sırtüstü pozisyonda yerleştirilir. İdame anestezik, burun konisi yoluyla izofflor ile sağlanır. Ultrason probunu manipüle ederken vücudun aşırı hareketini önlemek için farenin arka ayakları masaya sabitlenebilir.

Bu tamamlandıktan sonra, hayvanın pelvisinin orta hat kısmına ultrason jeli uygulanır. Bir jel uygulandıktan sonra, 40 megahertz'lik bir prob tutma cihazına sabitlenir ve yavaşça hayvanın vücuduna indirilir. Mesane, yuvarlak bir orta hat hipoekoik yapı olarak kolayca görülebilir.

Hayvan anestezi uygulanmadan önce önemli bir tahrişe maruz kalmadıysa, mesane tipik olarak zaten şişmiştir ve mesane distansiyonunu sağlamak için fareyi kateterize etmeyi gereksiz bulduk. Burada hem enine hem de boylamasına görüntüler elde edilebilir. Mesanenin lümeni içinde bir tümör kolayca görülür.

Bir tümör bulunursa, tümör boyutlarının ölçümü için görüntüler kaydedilebilir. Mesane tümörü kurulduktan sonra, fareler lipid nanopartiküllerinde formüle edilmiş küçük çift sarmallı RNA ile intravezikal olarak tedavi edilir. Genel anestezi uygulanır ve bir kez daha oftalmik merhem uygulanır.

Fare daha sonra sırtüstü pozisyona getirilir ve üretral kateterizasyon yapılır. Daha önce tarif ettiğimiz gibi, kateterin etrafındaki üretrayı tıkamak için dört oh ipek sütür kullanılır. Tipik olarak, burada gösterildiği gibi iki düğüm bağlanır.

Mesaneyi tamamen boşaltmak için bir stile iğnesine yüklenen boş bir şırınga kullanılır. 50 mikrolitre küçük çift sarmallı RNA, kilogram başına toplam üç miligramlık bir doz için intravezikal olarak aşılanır. İğne ve kateter daha sonra çıkarılır.

Fare, üretra tıkalı olarak toplam iki saat boyunca anestezi altında kalacaktır. Bu videoyu izledikten sonra, tümörü biyolüminesans görüntüleme ve ultrason ile izleyen ve tümörü intravezikal verilen küçük RNA ile tedavi eden ortotopik bir fare mesane tümörü modeli oluşturmak için bir yöntem hakkında iyi bir anlayışa sahip olmalısınız. Özellikle kateterizasyon ile biraz pratik gerektiren teknikte bazı nüanslar vardır, ancak genel olarak, kolayca tekrarlanabilir olması gereken bir protokoldür.

Mesane tümörlerini farelere yerleştirmede iyi bir başarı elde ettik ve küçük RNA ile tedavi etkileri çok umut verici. Bununla birlikte, bu protokolle ilgili en heyecan verici şey, fareleri küçük RNA ile tedavi ederken, aynı tekniğin mesane kanseri için herhangi bir intravezikal tedaviyi test etmek için kullanılabilmesidir.