Крыса Модель гематоэнцефалический барьер Нарушение чтобы позволить Целевые нейрососудистой терапии

Общая цель этой процедуры заключается в нарушении гематоэнцефалического барьера. Это достигается путем предварительного введения животному внутривенной анестезии с эндотрахеальными дыхательными путями. Далее обнажается бифуркация общей сонной артерии.

Затем в наружную сонную артерию вводится катетер. Наконец, вводят маннитол. В конечном счете, могут быть получены результаты, которые показывают нарушение гематоэнцефалического барьера из-за экстравазации синего красителя Эвана.

Основное преимущество этой методики перед существующими методами внутриартериальной терапии заключается в том, что она позволяет препаратам проникать в мозг, которые обычно не пересекают гематоэнцефалический барьер в физиологических условиях. Это имеет значение в области нейробиологии, потому что позволяет нам тестировать новые методы лечения, которые имеют плохую способность преодолевать гематоэнцефалический барьер. Последствия этого метода распространяются и на нейроонкологию, поскольку многие химиотерапевтические препараты не проникают через гематоэнцефалический барьер.

Что ж, хотя этот метод дает нам представление о новой онкологии, он также может предоставить нам информацию о других неврологических расстройствах, лечимых препаратами с плохой проницаемостью гематоэнцефалического барьера. Мы надеемся, что визуальная демонстрация этого метода позволит исследователям, знакомым с хирургией животных, использовать эту технику в своих лабораториях. Для начала приготовьте раствор 25% маннитола и убедитесь, что в нем нет кристаллов.

Если кристаллы присутствуют, растворите их, поместив флакон в водяную баню при температуре 80 градусов Цельсия, и перемешайте. Периодически записывайте массу животного и подготовьте два шприца объемом 12 мл пропофола, которые будут подаваться со скоростью 0,1 миллилитра в минуту. После обезболивания животного в индукционной камере положите его на одноразовое полотенце и побрейте его шею и внутреннюю поверхность бедер.

Поместите животное обратно в индукционную камеру на три минуты. Чтобы подготовиться к интубации для интубации крысы, начните с подготовки эндотрахеальной трубки с внутривенным катетером. Трубка должна быть достаточно большой, чтобы обеспечить достаточный поток воздуха, но достаточно маленькой, чтобы поместиться в трахею, не причиняя вреда.

Чтобы сделать стилус, вытащите иглу из пластикового катетера и аккуратно сломайте иглу. Примерно в одном сантиметре от ее острого кончика введите иглу обратно в катетер. Далее подвесьте крысу за зубы на наклонной поверхности, посветите фонарем прямо на шею животного, выровненную между его ушами.

Далее введите небольшой шпатель в ротоглотку. Примерно три сантиметра. Поднимите вверх, осторожно вытягивая язык изо рта.

Представьте себе отверстие трахеи в виде небольшого отверстия, которое открывается и закрывается. С каждым вдохом осторожно вводите катетер в отверстие, следя за тем, чтобы не вводить его в хрящ чувствительной трахеи. Установите аппарат ИВЛ на один литр в минуту и 60 ударов в минуту, а затем на 2% содержание фтора, затем подключите катетер к аппарату ИВЛ и прикрепите трубку к рабочей поверхности.

Убедитесь, что животное находится под наркозом, выполнив щипку пальца ноги. Обезопасьте маршрут, прикрепив все четыре конечности в хвосте к рабочей поверхности. Трижды потрите выбритые участки шеи и паха мылом с хлоргексидином.

Затем скрабируйте хлоргексидином. Прополоскать три раза. Прикрепите шприц с пропофолом к набору удлинителей для внутривенных вливаний и установите шприц на инфузионный насос.

Далее с помощью скальпеля прорежьте кожу выбритого бедра, не разрезая мышцу. Затем с помощью щипцов откройте разрез и найдите бедренную вену, а затем оттяните ткань над артерией, чтобы обнажить сосуд. Введите в вену ветеринарный внутривенный катетер с моновыбросом 26 G.

Как только игла проткнет стенку вены, надавливать станет легче. Втяните иглу и введите катетер в сосуд на три-пять минут. После начала инфузии пропофола переключите газ для анестезии на смесь 50% O2 и 50% N два O и отключите изоф фтора.

Чтобы обнажить разветвление общей сонной артерии, начните с использования лезвия скальпеля, чтобы сделать разрез по средней линии на шее. Разрежьте поверхностную фасию по средней линии, чтобы добраться до грудинной подъязычной мышцы над трахеей. Отодвиньте ткань в сторону, чтобы визуализировать группу из трех мышц: грудинной подъязычной кости, желудочной и грудной сосцевидной мышцы, которые образуют крысиный сонный треугольник с помощью щипцов или ножниц.

Отделите фасцию между мышцами сонного треугольника, чтобы обнажить сонную артерию. Используйте биполярное прижигание для разделения мелких сосудов вместе с марлей и ватными тампонами Чтобы остановить кровотечение, используйте ретракторы, чтобы раздвинуть мышцы с помощью щипцов. Отодвиньте ткань от сонной артерии и найдите разветвление.

Обнажите затылочную артерию дистальнее разветвления. Прижгите его между щипцами и с помощью электрокаутеризации отделите щипцами. Полностью обнажите бифуркацию сонной артерии и как можно большую часть наружной сонной артерии или ЭКА.

Обнажите верхнюю щитовидную артерию, ответвляющуюся от ECA дистальнее затылочной артерии. Прижгите его между щипцами и разделите, чтобы катетеризировать ЭХА. Положите под него два отрезка четырех шелков.

Используйте гемостат и возьмите один отрезок шва и втяните заднюю колику ECA с другим швом. Завяжите его хирургическим узлом как можно дальше краниально, дистальнее бифуркации и проксимальнее постоянной лигатуры. Неплотно завяжите еще один хирургический узел, чтобы расслабить артерию.

Орошите его 1%-ным лидокаином, заполните катетер гепаринизированным физиологическим раствором. Далее расположите временный зажим для сосудов под углом, максимально приближенным к раздвоению. Затем сдвиньте свободный узел к зажиму с помощью микроножниц.

Сделайте небольшой разрез в ЭКА как раз проксимальнее лигатуры. Если зажим и лигатура надежно закреплены, кровотечения с использованием щипцов быть не должно. Чтобы контролировать стенки ЭХА, введите скошенный конец катетера в сосуд с помощью ослабленного хирургического узла.

Закрепите катетер. Перевяжите артерию вокруг катетера, затем снимите зажим и с помощью ватного тампона очистите эту область. Продвинуте катетер примерно на один миллиметр дистальнее места бифуркации.

Используйте щипцы для удержания артерии проксимальнее узла, чтобы обеспечить иммобилизацию сосуда. Для введения маннита. Наполните восьмидюймовый набор удлинителей для внутривенных вливаний и шестимиллилитровый шприц маннитолом, не создавая пузырьков воздуха.

Храните его при температуре 37 градусов Цельсия, чтобы визуализировать нарушение гематоэнцефалического барьера, или BBBD вводите два миллиграмма на килограмм 2% Evans Blue через новое место внутривенного введения на ноге, противоположное инфузии пропофола. Прикрепите набор удлинителей к пятимикронному фильтру и заполните его минолом для удаления пузырьков воздуха. Затем прикрепите его к стопорному крану, не создавая пузырей.

Вводите маннит в дозе 0,09 миллилитра в секунду В течение 25 секунд наблюдайте, чтобы маннит достиг равновесия с потоком в общей сонной артерии в точке, расположенной чуть ближе к внутренней сонной артерии, он должен пульсировать вместе с частотой сердечных сокращений крысы. Следите за тем, чтобы маннит не стекал к сердцу, что указывает на то, что поток преодолел кровяное давление крысы и может вызвать серьезные осложнения. Нарушение гематоэнцефалического барьера на одной стороне мозга позволяет синему полушарию проникать внутрь и окрашивать его в синий цвет, в то время как полушарие, не вызывающее нарушений, остается неизменным.

Здесь показан пример мозга без разрушения гематоэнцефалического барьера или ГЭБ, а вот пример мозга, окрашенного в синий цвет после осмотического ГЭБ, обратите внимание, что правое полушарие окрашено и что некоторое количество синего попало в левое полушарие около медиальной продольной щели в результате смешивания кровотока в круге Виллиса. Этот метод прокладывает путь для исследователей к изучению методов лечения, которые не пересекают гематоэнцефалический барьер в модели крысы. После просмотра этого видео вы сможете нарушить размытый мозговой барьер путем катетеризации сонной артерии и вливания раствора манитола непосредственно в мозг.