Name: Cre Recombinase Kokain Klima yeri tercihi Hedef Genlerin Rolü Eğitim için ifade Viral Vektörler stereotaksik Mikroenjeksiyon (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-07-30T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 22 s
Description: Öğrenin fare beynine viral vektörlerin stereotaksik mikroenjeksiyonu ile koşullu yer tercihi davranışında gen fonksiyonlarını incelemeyi. Bu yöntem bağımlılık ve ödül mekanizmalarını anlamaya yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Yazarlar genişletilmiş şartlı yer tercihi protokol kurma konusunda yardım için Anni Lee ve Maureen Byrne teşekkür etmek istiyorum.

Tüm işlemler Weill Cornell Medical College Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu kurallarına uygun olarak yürütülmektedir. 1. Hazırlık ve Viral Vektörlerin Stereotaksik teslim için Kurulum <ol><li> Bir araç, steril bez veya steril eldiven giyen el steril olmayan bir yüzeye temas ile kirlenmiş ise sıcak bir boncuk sterilizatör kullanılarak cihaz, atmak veya yeniden sterilize, çubukla atmak ya da yeni steril eldiven değiştirmek. </li><li> Ameliyat sonrası iyileşme için sıcak bir ısı bloğu üzerinde yatak ile bir fare kafes yerleştirin. </li><li> Kafa derisi sterilize etmek için baş ve etanol ve iyot tıraş için elektrikli tıraş makinesi ayarlayın. </li><li> % 70 etanol ile kulak çubukları ve stereotaksi ağız tutun silin. </li><li> 5 ul Hamilton şırınga kullanarak, viral vektör (1 x 10 6 viral parçacıkların / ml) 5 ul hazırlamak ve stereotaksi üzerinde şırınga tutucu yılında kuruldu. </li><li> Mikrodalga ısıtma yastığı veya üzerinde elektrik ped açmakstereotaksi üzerinde nd yer. Yanık riskini azaltmak için temiz bir emici ped ile kaplayın. Monitör fare vücut ısısı (97-99,5 ° F arasında) sık sık işlem boyunca. </li><li> Ketamin (100 mg / kg) ve ksilazin (20 mg / kg) karışımı ile fare (22-35 g ağırlığında) enjekte edilir. Bir fare anestezi sonra, tutam kuyruk ucu fare tarafından mükemmel bir refleksle kontrol ve fare yeterli anestezi olduğundan emin olmak için herhangi bir hareket veya tepki dikkat etmek. </li><li> Kulak ve göz arasında baş tıraş. </li><li> Etanol ve iyot steril pamuk aplikatör alternatif ile tıraşlı kafasını temizleyin. </li><li> Stereotaksi üzerinde ısıtmalı pad fare aktarın. </li></ol> 2. Viral Vektörler stereotaksik Mikroenjeksiyon <ol><li> Ameliyat boyunca steril eldiven giyin. Eldiven steril olmayan yüzeylere dokunarak herhangi bir noktada kontamine olmuşsa, eldiven değiştirin. </li><li> Sıfır diş bar ve kulak çubuğu ölçekler. </li><li> Diş çubuğunda diş ayarlayın. </li><li> Namlu vidalayın. Kıpır kıpır ya da bıyık hareket halindement herhangi bir zamanda not edilir, ketamin (100 mg / kg) ve ksilazin (20 mg / kg) karışımı, bir IP destek dozu (~ 0.05 cc) yönetmek. </li><li> Kulak çubukları vidalayın. </li><li> PuraLube ile gözleri yağlayın. </li><li> Sadece bir neşter ile kulakların arkasında açık kafa derisi kesin. </li><li> Cilt soyma uzak kafatası için kafa derisi köşelerinde yer bulldog klipleri. Bregma ve lambda kolayca görünür olmalıdır. </li><li> Bregma gelen lambda emin olun dikiş düz hizalanır. Dikiş başın çarpık yeni ayarın konumlandırma ise. </li><li> Stereotaksi tüm ayarları sıfırlanır emin olmak için kontrol edin. </li><li> Bregma yerinde iğne ucu koymak. </li><li> Bregma ve lambda her ikisi için tüm koordinatları ölçün. Bu ventral / dorsal, yan / medial ve ön / arka konumlarını içerir. </li><li> Bregma ve lambda için ventral koordinatları birbirinden 0,02 mm içinde kadar kafa ayarlayın. </li><li> Bir kez (M / L) yan / medial koordinatlarına mediale bregma gelen, dışarı gitmek uyumlu. Emin olmaksol ve sağ taraf birbirinden 0,02 mm mesafede hizalanır. </li><li> Bregma ve oradan yeniden merkezi iğne ucu istenen anterior / posterior koordinat için (A / P) anterior / posterior yönde hareket. </li><li> Gerekirse, açı bir yönde iğne ve stereotaksi kilitli olduğundan emin olun. (- 1.52 + /) Sol M / L koordinat için dışarı çıkmak </li><li> Kuyu delinmiş sonra referans olarak kullanmak için kafatasının üst ventral konumunu ölçün. </li><li> Istenilen koordinat steril bir matkap ucu kullanarak bir sondaj matkap. Iğne kafatası yoluyla kesintisiz girebilirsiniz kontrol edin. </li><li> İstenen ventral koordinat için iğne indirin. </li><li> Bir kez koordinat daldırma 0.015 mm viral vektör için küçük bir cep oluşturmak için ~ 10 saniye altında, ulaşılır. </li><li> ~ 0.1 ul / dk &#39;lık bir oranda viral vektörün istenen ses enjekte edilir. Tamamen yaygın viral vektör için 3 dakika bekleyin. Iğne ucu 0,015 mm kaldırın ve ek 2 dakika bekleyin. </li><li>Ters yönde iğne (açılı enjeksiyon yapan varsa) Dip. Yine, kafatasının üst için bir referans olarak ventral konumunu kaydetmek. </li><li> (Ikili enjeksiyon yapıyor ise) karşı tarafta viral vektör enjekte ilk tarafında aynı adımları tekrarlayın. </li><li> Steril bir pamuk aplikatör ucu ahşap ucunu kullanarak onları mühür iki delik için kemik balmumu uygulayın. </li><li> Kafa derisi dikin. </li><li> Yaralı bölgeye sinir bloğu uygulayın. </li><li> 45 dakika kurtarmak için ısı blok üzerinde ısıtılmış kafeste stereotaksi gelen fare ve yer çıkarın. </li><li> Dahil olmak üzere ağrı belirtileri için Monitör:, genel aktivite veya huzursuzluk azalmış gıda ve su tüketimi veya yüksek ses azalmıştır. Buprenorfin (0,05-0,2 mg / kg) gerektiğinde ağrı için bir hafta boyunca günde iki kez tatbik edilebilir. Kabul edilebilir alternatifleri arasında meperidin (sırasıyla, 20-60 mg / kg), pentazosin (10 mg / kg), nalbufin (4-8 mg / kg). </li></ol> 3. Klima Yeri Tercih: Acquisition, Extinction ve Yeniden <ol><li> Giyotin kapılı bir 60 saniye alışma dönemi için üç odacıklı yer tercihi aparatları (Med Associates Inc, St Albans, VT, ABD) merkez odasına yerleştirin fareler kapalı. </li><li> Alışma, açık giyotin kapı sonra ve MedPC IV yazılım (Med Associates, Inc) kullanılarak kaydedilen her odasında harcanan zaman ile 1.200 saniye tüm 3 odaları fareler ücretsiz keşif, sağlar. </li><li> Ön test sırasında performansa dayalı klima odalarına fareler atayın. Temel ön test sırasında en az tercih edilen oldu bölmesi ile takip eden 3 gün boyunca yanlı tasarım, çift ilaç uygulama kullanma. </li><li> Sn enjeksiyon hemen ardından 1200 için sabah oturumu sırasında ve kendilerine verilen odasında onları hapsedin, önümüzdeki 3 gün boyunca klima, kokain (ip 10 mg / kg) ile fareler enjekte. Seanstan sonra kendi kafeslerine fareler dönün. 4 saat sonra, (tuzlu su ile farenin enjekte 0.01 ml / gvücut ağırlığı) ve 1.200 sn öğleden sonra oturumu için karşı odasına onları hapsedin. </li><li> Satın alınması için test etmek için, giyotin kapı ile merkezi odasında yer fareler 60 saniye alışma dönemi için kapalı. Açık giyotin kapı ve MedPC IV yazılım (Med Associates, Inc) tarafından kaydedilen tüm odalarında harcanan zaman ile, 1.200 saniye ücretsiz keşif sağlar. Kokain-eşleştirilmiş odasında harcanan süreyi gelen tuzlu-eşleştirilmiş odasında harcanan süreyi çıkarılarak tercih hesaplayın. </li><li> Yer tercihi söndürmek için, satın alma için test sonrasında 24 saat başında, en az 2 saat ayrılmış aynı cihaz içinde her gün ücretsiz keşif iki 20 dakika seans, fareler ortaya çıkarmak. Tüm odacıklar için harcanan zaman tekrar kaydedilmelidir ve ilk CPP büyüklüğünü her nesli oturumu ile karşılaştırıldığında edilmelidir. </li><li> Fareler par için olsun tercih değerlendirerek ilaca bağlı tercihi sönmüş olup olmadığını belirlemekiki ardışık yok gün boyunca ticular odası satın alma tercihi puanı ile karşılaştırıldığında oldukça düşüktür. </li><li> Kokain bir priming doz (5 veya 10 mg / kg, ip) ile fareler yeniden ve ücretsiz keşif sağlayan cihazın yeniden ortaya çıkarmak ve her bölümünde harcanan zaman kaydedin. </li><li> Euthasol ötenazi solüsyonu (150 mg / kg) yönetmek. Transcardially% 4 paraformaldehid (PFA) ile fareler serpmek ve doğru mikroenjeksiyon yerleştirme doğrulamak için bir histolojik muayene. </li></ol>

<ol><li>Nestler, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+neurobiology+of+addiction%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+on+Addictions%22%5BJournal%5D)">Molecular neurobiology of addiction.</a> American Journal on Addictions. 10 (3), (2001).</li>
<li>Thomas, M. J., Kalivas, P. W., Shaham, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroplasticity+in+the+mesolimbic+dopamine+system+and+cocaine+addiction%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Neuroplasticity in the mesolimbic dopamine system and cocaine addiction.</a> British Journal of Pharmacology. 154 (2), (2008).</li>
<li>Robinson, T. E., Browman, K. E., Crombag, H. S., Badiani, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+the+induction+or+expression+of+psychostimulant+sensitization+by+the+circumstances+surrounding+drug+administration%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+and+Biobehavioral+Reviews%22%5BJournal%5D)">Modulation of the induction or expression of psychostimulant sensitization by the circumstances surrounding drug administration.</a> Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 22 (2), (1998).</li>
<li>Tzschentke, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+reward+with+the+conditioned+place+preference+%28CPP%29+paradigm%3A+update+of+the+last+decade%5BTitle%5D)+AND+%22Addiction+Biology%22%5BJournal%5D)">Measuring reward with the conditioned place preference (CPP) paradigm: update of the last decade.</a> Addiction Biology. 12 (3-4), (2007).</li>
<li>Mueller, D., Stewart, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cocaine-induced+conditioned+place+preference%3A+reinstatement+by+priming+injections+of+cocaine+after+extinction%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Cocaine-induced conditioned place preference: reinstatement by priming injections of cocaine after extinction.</a> Behavioural Brain Research. 115 (1), (2000).</li>
<li>Itzhak, Y., Martin, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cocaine-induced+conditioned+place+preference+in+mice%3A+Induction%2C+extinction+and+reinstatement+by+related+psychostimulants%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Cocaine-induced conditioned place preference in mice: Induction, extinction and reinstatement by related psychostimulants.</a> Neuropsychopharmacology. 26 (1), (2002).</li>
<li>Kreibich, A. S., Blendy, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((cAMP+response+element-binding+protein+is+required+for+stress+but+not+cocaine-induced+reinstatement%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">cAMP response element-binding protein is required for stress but not cocaine-induced reinstatement.</a> Journal of Neuroscience. 24 (30), (2004).</li>
<li>Obrien, C. P., Childress, A. R., McLellan, T., Ehrman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrating+systematic+cue+exposure+with+standard+treatment+in+recovering+drug+dependent+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Addictive+Behaviors%22%5BJournal%5D)">Integrating systematic cue exposure with standard treatment in recovering drug dependent patients.</a> Addictive Behaviors. 15 (4), (1990).</li>
<li>O'Brien, C. P., Childress, A. R., McLellan, A. T., Ehrman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+learning+model+of+addiction%5BTitle%5D)+AND+%22Research+publications+-+Association+for+Research+in+Nervous+and+Mental+Disease%22%5BJournal%5D)">A learning model of addiction.</a> Research publications - Association for Research in Nervous and Mental Disease. 70, (1992).</li>
<li>Stewart, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Psychological+and+neural+mechanisms+of+relapse%5BTitle%5D)+AND+%22Philosophical+Transactions+of+the+Royal+Society+B-Biological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Psychological and neural mechanisms of relapse.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society B-Biological Sciences. 363 (1507), (2008).</li>
<li>Bueler, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adeno+associated+viral+vectors+for+gene+transfer+and+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Adeno associated viral vectors for gene transfer and gene therapy.</a> Biological Chemistry. 380, (1999).</li>
<li>Xiao, X., Li, J., McCown, T. J., Samulski, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+transfer+by+adeno-associated+virus+vectors+into+the+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">Gene transfer by adeno-associated virus vectors into the central nervous system.</a> Experimental Neurology. 144 (1), (1997).</li>
<li>Alexander, I. E., Russell, D. W., Spence, A. M., Miller, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+gamma+irradiation+on+the+transduction+of+dividing+and+nondividing+cells+in+brain+and+muscle+of+rats+by+adeno-associated+virus+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Effects of gamma irradiation on the transduction of dividing and nondividing cells in brain and muscle of rats by adeno-associated virus vectors.</a> Human Gene Therapy. 7 (7), (1996).</li>
<li>Schierberl, K., Hao, J., Tropea, T. F., Ra, S., Giordano, T. P., Xu, Q., Garraway, S. M., Hofmann, F., Moosmang, S., Striessnig, J., Inturrisi, C. E., Rajadhyaksha, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ca%28v%291.2+L-Type+Ca2%2B+Channels+Mediate+Cocaine-Induced+GluA1+Trafficking+in+the+Nucleus+Accumbens%2C+a+Long-Term+Adaptation+Dependent+on+Ventral+Tegmental+Area+Ca%28v%291.3+Channels%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Ca(v)1.2 L-Type Ca2+ Channels Mediate Cocaine-Induced GluA1 Trafficking in the Nucleus Accumbens, a Long-Term Adaptation Dependent on Ventral Tegmental Area Ca(v)1.3 Channels.</a> Journal of Neuroscience. 31 (38), (2011).</li>
<li>Schierberl, K., Giordano, T., Satpute, S., Hao, J., Kaur, G., Hofmann, F., Moosmang, S., Striessnig, J., Rajadhyaksha, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ca%28v%291.3+L-type+Ca2%2B+channels+mediate+long-term+adaptation+in+dopamine+D2L-mediated+GluA1+trafficking+in+the+dorsal+striatum+following+cocaine+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22Channels%22%5BJournal%5D)">Ca(v)1.3 L-type Ca2+ channels mediate long-term adaptation in dopamine D2L-mediated GluA1 trafficking in the dorsal striatum following cocaine exposure.</a> Channels. 6 (1), 11-17 (2012).</li>
<li>Nestler, E. J., Bergson, C. M., Gultart, X., Hope, B. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+neural+gene+expression+in+opiate+and+cocaine+addiction%5BTitle%5D)+AND+%22NIDA+Research+Monograph%22%5BJournal%5D)">Regulation of neural gene expression in opiate and cocaine addiction.</a> NIDA Research Monograph. 125, (1993).</li>
<li>Hyman, S. E., Malenka, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Addiction+and+the+brain%3A+The+neurobiology+of+compulsion+and+its+persistence%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Addiction and the brain: The neurobiology of compulsion and its persistence.</a> Nature Reviews Neuroscience. 2 (10), (2001).</li>
<li>Lee, A. S., Ra, S., Rajadhyaksha, A. M., Britt, J. K., De Jesus-Cortes, H., Gonzales, K. L., Lee, A., Moosmang, S., Hofmann, F., Pieper, A. A., Rajadhyaksha, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Forebrain+elimination+of+cacna1c+mediates+anxiety-like+behavior+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Forebrain elimination of cacna1c mediates anxiety-like behavior in mice.</a> Molecular Psychiatry. 17 (11), (2012).</li>
<li>Li, X., Wolf, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+of+virus-infected+brain+regions+using+a+GFP-illuminating+flashlight+enables+accurate+and+rapid+dissection+for+biochemical+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Visualization of virus-infected brain regions using a GFP-illuminating flashlight enables accurate and rapid dissection for biochemical analysis.</a> Journal of Neuroscience Methods. 201 (1), 177-179 (2011).</li>
<li>Ahmed, B. Y., Chakravarthy, S., Eggers, R., Hermens, W., Zhang, J. Y., Niclou, S. P., Levelt, C., Sablitzky, F., Anderson, P. N., Lieberman, A. R., Verhaagen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+delivery+of+Cre-recombinase+to+neurons+in+vivo+and+stable+transduction+of+neurons+using+adeno-associated+and+lentiviral+vectors+-+art.+no.+5%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Efficient delivery of Cre-recombinase to neurons in vivo and stable transduction of neurons using adeno-associated and lentiviral vectors - art. no. 5.</a> BMC Neuroscience. 5, (2004).</li>
<li>Kaspar, B. K., Vissel, B., Bengoechea, T., Crone, S., Randolph-Moore, L., Muller, R., Brandon, E. P., Schaffer, D., Verma, I. M., Lee, K. F., Heinemann, S. F., Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adeno-associated+virus+effectively+mediates+conditional+gene+modification+in+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Adeno-associated virus effectively mediates conditional gene modification in the brain.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 99 (4), 2320-2325 (2002).</li>
<li>Neve, R. L., Neve, K. A., Nestler, E. J., Carlezon, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+herpes+virus+amplicon+vectors+to+study+brain+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">Use of herpes virus amplicon vectors to study brain disorders.</a> Biotechniques. 39 (3), 9(2005).</li>
<li>Pohl, M., Braz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+therapy+of+pain%3A+emerging+strategies+and+future+directions%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Gene therapy of pain: emerging strategies and future directions.</a> European Journal of Pharmacology. 429 (1-3), (2001).</li>
<li>Rinaldi, A., Marshall, K. R., Preston, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+non-cytotoxic+herpes+simplex+virus+vector+which+expresses+Cre+recombinase+directs+efficient+site+specific+recombination%5BTitle%5D)+AND+%22Virus+Research%22%5BJournal%5D)">A non-cytotoxic herpes simplex virus vector which expresses Cre recombinase directs efficient site specific recombination.</a> Virus Research. 65 (1), (1999).</li>
<li>Choi, V. W., McCarty, D. M., Samulski, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AAV+hybrid+serotypes%3A+Improved+vectors+for+gene+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">AAV hybrid serotypes: Improved vectors for gene delivery.</a> Current Gene Therapy. 5 (3), (2005).</li>
<li>Passini, M. A., Dodge, J. C., Bu, J., Yang, W., Zhao, Q., Sondhi, D., Hackett, N. R., Kaminsky, S. M., Mao, Q. W., Shihabuddin, L. S., Cheng, S. H., Sleat, D. E., Stewart, G. R., Davidson, B. L., Lobel, P., Crystal, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracranial+delivery+of+CLN2+reduces+brain+pathology+in+a+mouse+model+of+classical+late+infantile+neuronal+ceroid+lipofuscinosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Intracranial delivery of CLN2 reduces brain pathology in a mouse model of classical late infantile neuronal ceroid lipofuscinosis.</a> Journal of Neuroscience. 26 (5), (2006).</li>
<li>Samulski, R. J., Chang, L. S., Shenk, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Helper-free+stocks+of+recombinant+adeno-associated+viruses+-+normal+integration+does+not+require+viral+gene-expression%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Helper-free stocks of recombinant adeno-associated viruses - normal integration does not require viral gene-expression.</a> Journal of Virology. 63 (9), (1989).</li>
<li>Kaplitt, M. G., Leone, P., Samulski, R. J., Xiao, X., Pfaff, D. W., Omalley, K. L., During, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+gene-expression+and+phenotypic+correction+using+adenoassociated+virus+vectors+in+the+mammalian+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genetics%22%5BJournal%5D)">Long-term gene-expression and phenotypic correction using adenoassociated virus vectors in the mammalian brain.</a> Nature Genetics. 8 (2), (1994).</li>
<li>Johansen, J. P., Hamanaka, H., Monfils, M. H., Behnia, R., Deisseroth, K., Blair, H. T., LeDoux, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+activation+of+lateral+amygdala+pyramidal+cells+instructs+associative+fear+learning%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Optical activation of lateral amygdala pyramidal cells instructs associative fear learning.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (28), (2010).</li>
<li>Zhang, F., Gradinaru, V., Adamantidis, A. R., Durand, R., Airan, R. D., de Lecea, L., Deisseroth, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optogenetic+interrogation+of+neural+circuits%3A+technology+for+probing+mammalian+brain+structures%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Optogenetic interrogation of neural circuits: technology for probing mammalian brain structures.</a> Nature Protocols. 5 (3), (2010).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Yok ve iade aşamaları içerir CPP ile birlikte viral vektörlerin stereotaksik mikroenjeksiyon ile bölgesel ve zamansal özgü gen ablasyon bağımlılık benzeri davranış üç farklı evrelerine genlerin belirli katkıları araştırılması için izin verir. Geleneksel Cre-LoxP sistemi kullanılarak elde edilir koşullu nakavt uzay-zamansal sınırlı gen ablasyonu için sağlarken, stereotaxically floxed farelerin ayrı beyin alanlarına Cre-recombinase microinjecting ne zaman ve nerede bir gen çıkmışsa bile sıkı bir denetim sağlar. Buna ek ol...

Kokain son derece takviye psikostimulandır. Sürekli temas halinde, çeşitli moleküler ve hücresel adaptasyon kompulsif neden olduğuna inanılmaktadır ödül-ilgili beyin devre meydana ilaç arama ciddi bir klinik sorun 1 teşkil nüks oranlarının yüksek isteyen, davranış. Kokain gen ifadesinin düzenlenmesine bu uzun süreli davranışsal etki gösterir. Kronik kokain kullanımı kaynaklanan uyarlamalar incelemek için, klinik öncesi kemirgen modelleri yaygın olarak kullanılmaktadır. Böyle bir model klimalı yer tercihi (CPP) paradigma. Bu model daha önce nötr çevre ve kokain ödüllendirici özellikleri arasındaki öğrenilen bir ilişki gelişimini içerir. Belirli bir odası ile kokain birkaç eşleşmeleri sonra, hayvanların serbestçe kokain-eşleştirilmiş ve olmayan kokain-eşleştirilmiş ortamları keşfetmek için izin verilir ve ilaç-eşleştirilmiş bölmesi tercih ederseniz, bir kokain kaynaklı Plac edindikleri söyleniyore tercih. Ayrıca, bir nesli eğitim döneminden sonra, bu paradigma kokain arama davranışı bağlamında özel iade incelemek için kullanılabilir. Bu bağımlılık taklit daha doğru olduğu düşünülmektedir uzun vadeli kokain kaynaklı davranışsal ve moleküler plastisite 2,3 ve öz-yönetim (SA) incelemek için kullanılır psikomotor hassasiyete,, gibi bağımlılık benzeri davranış diğer davranış modelleri ile karşılaştırıldığında, benzeri insanlarda bulunan davranış, CPP paradigma kokain bağlamsal öğrenme 4 incelemek için basit bir işlemdir. CPP protokolleri uygun benzer ilaç özlem ve nüks 5-7 ve hangi insan ne olacağı yönlerini özetlemek inanılıyor ilaç arama davranışı ve uyuşturucu altında yatan mekanizmaların araştırılması için izin SA, için, yok ve iade aşamaları kapsayacak şekilde genişletilebilir - ve işaret bağlı nüks 8-10. Bir mekanizma olduğunu vurgulayansatın alma, yok, ve eski haline de dahil olmak üzere CPP en farklı aşamaları, her özelliğidir kokain-bağlı davranışsal plastisite, farklı beyin bölgeleri içinde gen ifadesinin benzersiz imza aktivasyonu. Doğrudan davranış değişiklikleri kokain-neden aracılık ödül-ilgili beyin bölgeleri içinde hangi genlerin test etmek için, bir bölgesel-belirli bir şekilde seçici onları manipüle edebilmek için yararlıdır. Bu ulaşmanın bir yolu ifade Cre recombinase LoxP siteleri (floxed fare) ile çevrili hedef genlerin sahip farelerin farklı beyin alanlara, stereotaksik cerrahi ile bu rekombinant adenoassociated viral (rAAV) vektörler microinject etmektir. Bu yöntem, ne zaman ve nerede genler bağışıklık yanıtlarını 11-13 neden olmadan, iki bölme ve olmayan bölünmesi nöronlarda, ablasyon olan üzerinde çok hassas zamansal ve bölgesel kontrol sağlar. Kontrolü bu düzeyde floxed fareler w üreme geleneksel Cre-LoxP teknolojisi üzerinden önemli bir avantajı temsilbu da, bir endojen gen promotörünün kontrolü altında Cre rekombinazı ifade i&#39;inci farenin zamanlaması ve gen silinmesi dağılımı daha sıkı bir şekilde kontrol edilebilir. Ayrıca, viral vektör-aracılı gen nakavt geleneksel nakavt stratejileri kullanarak oluşabilecek olası gelişimsel telafi edici etkileri circumvents. Öz-yönetim ve psikomotor hassasiyete de dahil olmak üzere ayrı aşamaları, dahil davranışsal paradigmalar ubiquitously uygulanabilir belirli genlerin rolü değerlendirmek için floxed farelerin beyin içine, burada rAAV-Cre mikroenjeksiyon açıklanmıştır kokain CPP, ek olarak. Örneğin, bizim laboratuvar kokain psikomotor hassasiyete 14 Ca v 1.2 L-tipi Ca 2 + kanalları rolünü incelemek için rAAV-Cre teknolojisi kullanmıştır. Özellikle, rAAV-Cre göstermek için gen kodlama Ca v 1.2 floxed ile farelerin nükleus akumbens (NAC), içine microinjected olduğunu Ca v </sub&gt; 1.2 bu bölgede aracılık psikomotor hassasiyet 14,15 ifadesi aşamasında hareket. Psikomotor hassasiyete Ca v 1.3 L-tipi Ca 2 + kanalları rolünü değerlendirirken ilgi floxed gen ile fareler var yoksa Ancak, rAAV-Cre strateji kullanılamaz, olarak deneyim oldu. Koşullu fareler ilgi belirli bir gen için var yoksa bu nedenle, rAAV-Cre kullanarak bir sınırlama kendini göstermektedir. Ancak, Ca v 1.3 kanal 14,15 rolünü incelemek için yaptığı gibi ifade siRNA, demonte hedef genlerin için kullanılabilir rAAVs. Floxed farelerin farklı beyin bölgeleri içine rAAV-Cre microinjecting ve sonra CPP paradigma bunları test çeşitli bağımlılık benzeri davranış aşamaları ve nerede hareket eden aracılık belirli genlerin soruşturma için izin verir. Bu paradigma kullanımı özünde tekrarlanan kokain yönetim br kacirilma nasıl anlayışımızda destekli vardırains ödül devresi bağımlısı devlet 1,16,17 yol açan moleküler sinyal iletim yollarının ve gen ifadesinde uyumsuz değişikliklere neden.

<table><tbody><tr><td>Şartlı yer tercihi aktivite odaları</td><td>Med Associates, Inc., St. Albans, VT, ABD</td><td>MED-CPP-MS</td><td></td></tr><tr><td>Fare için stereotaksik hizalama sistemi</td><td>David Kopf Instruments, Tujunga, CA, ABD</td><td>model 900</td><td></td></tr><tr><td>Hamilton şırıngaları</td><td>Hamilton Company, Reno, Nevada, ABD</td><td>7634-01</td><td></td></tr><tr><td>rAAV2-Cre-GFP</td><td>Vector BioLabs, Philadelphia, PA, ABD</td><td>7016</td><td></td></tr><tr><td>rAAV2-GFP</td><td>Vektör BioLabs, Philadelphia, PA, ABD</td><td>7004</td><td></td></tr></tbody></table>

cre recombinase kokain klima yeri tercihi hedef genlerin rolü eğitim için ifade viral vektörler stereotaksik mikroenjeksiyon

Stereotaxic Microinjection of Viral Vectors Expressing Cre Recombinase to Study the Role of Target Genes in Cocaine Conditioned Place Preference

Ilgi seçici nakavt genlere ayrı fare beyin bölgeye Cre recombinase ifade rekombinant adenoassociated viral (rAAV) vektörler microinjecting mevcut yöntemlere göre, gen silme gelişmiş zamansal ve bölgesel özel kontrol sağlar. Koşullu silme de floxed geni taşıyan fareler ile özel gen yararlanıcı kontrolü altında ifade Cre recombinase, stereotaksik mikroenjeksiyon ilgi deneyci belirlenmiş zaman noktalarında ayrık beyin bölgelerinin hedef için izin verdiği çiftleşme fareler tarafından elde edilebilir olsa. Kokain klimalı yer tercihi, ve öz-yönetim veya çekilme, yok ve / veya geri iadesi evreleri içerebilir psikomotor hassasiyet gibi diğer kokain davranışsal paradigmalar bağlamında, bu teknik bu farklı hedef genlerin eşsiz katkısı keşfetmek özellikle yararlıdır kokain bağlı plastisite davranış modelleri aşamaları. Özellikle,Bu teknik zaman karşısındaki davranışı katkılarını test etmek için bir davranış ayrık aşamaları sırasında hedef genlerin selektif ablasyonu için olanak sağlar. Sonuçta, bu anlayış bağımlılık davranışı her aşamasında kendilerini en güçlü risk faktörleri ele almak için en iyi edebiliyoruz daha hedefli tedavi sağlar.

CPP Microinjected fareler üzerinde CPP yaptıktan sonra, bir kontrol enjeksiyonlu bir kohort (rAAV-GFP) fareler normalde ilaç-eşleştirilmiş odası (Şekil 1A, 1B) için tercih edindikleri doğrulamalısınız. Fare kokain tercihi (tuzlu-eşleştirilmiş odasında geçirdiği kokain-eşleştirilmiş odası eksi zaman harcanan zaman) temel tercihi skoru (Şekil 1B, A vs B) göre anlamlı derecede yüksek olduğu zaman belirli bir oda için tercih elde etmiş kabul edilir . Bir grup olara...

Bu makalede, fare beynine viral vektörler microinject ve sonra satın alma, yok olma ve iade faz içeren klimalı yerde tercih paradigma test etmek için nasıl.

Cre Recombinase Kokain Klima yeri tercihi Hedef Genlerin Rolü Eğitim için ifade Viral Vektörler stereotaksik Mikroenjeksiyon

Microinjecting recombinant adenoassociated viral (rAAV) vectors expressing Cre recombinase into distinct mouse brain regions to selectively knockout genes ...

Bu prosedürün genel amacı, durum tercihi paradigmasının farklı evreleri boyunca hedef genleri seçici olarak ablate etmek ve bu genlerin zaman içindeki davranışa katkısını test etmektir. Bu işlem, öncelikle Cre rekombinaz eksprese eden rekombinant adeno ilişkili viral vektörün stereotaksik mikroenjeksiyonu ile gerçekleştirilir. Ardından, maksimum Cre reaktivasyonu için farelerin 10 ila 14 gün boyunca ana kafeslerinde iyileşmelerine izin verilir.Prosedürün üçüncü adımı, edinim, sönme ve yeniden canlanma aşamalarını içeren koşullu yer tercihi testinin farelere uygulanmasıdır. Prosedürün son adımı, mikroenjeksiyon yerleşiminin doğruluğunu onaylamak için mikroenjeksiyon yapılan farelerin histolojik incelemesinin gerçekleştirilmesidir. Nihayetinde, koşullu yer tercihi davranışsal testleri aracılığıyla gen nakavtına yanıt olarak edinim, sönme ve/veya yeniden canlanma davranışındaki değişiklikleri gösteren sonuçlar elde edilebilir.Bu tekniğin CRE lock P eşleşme sistemi gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, gen nakavtının zamanlamasını ve anatomik özgüllüğünü ayrı ayrı olarak daha spesifik bir şekilde belirlemeye olanak tanımasıdır; bu da davranışın her evresinde gen kaybının araştırı

stereotaxic-microinjection-viral-vectors-expressing-cre-recombinase

Research

JoVE Journal

Behavior

Davranış

Kaynak: Chen, S., et al., Yenidoğan Fare Beyinlerinin Striatal Hücrelerinde Genetik Manipülasyon için Stereotaksik Cerrahi. J. Vis. Uzm. (2018)Bu video, Cre rekombinaz ve yeşil floresan proteini veya GFP'yi kodlayan bir viral vektörün, bir loxP ile çevrili STOP kasetini eksize ederek, kırmızı floresan proteinini veya RFP'yi bir raportör olarak aktive ederek gen manipülasyonu elde etmek için genetik olarak değiştirilmiş bir fare yavrusunun striatumuna stereotaksik enjeksiyonunu göstermektedir.

Bir Fare Yavrusu Striatumunda Gen Manipülasyonu için Viral Bir Vektörün Stereotaktik Mikroenjeksiyonu

Kaynak: Pereira, M. et. al., Viral Vektörlerin İntraserebral Enjeksiyonu ile Yerleşik Glial Hücrelerin İnternöronlara İn Vivo Doğrudan Yeniden Programlanması. J. Vis. Uzm. (2019)Bu video, Cre'ye bağımlı nöronal yeniden programlama ve floresan raportör genleri glial hücrelere iletmek için transgenik bir farenin serebral korteksine adeno-ilişkili bir virüsün stereotaksik enjeksiyonunu göstermektedir.

Bir fare modelinde glial hücre yeniden programlaması için viral vektörlerin stereotaksik enjeksiyonu

Kaynak: Fricano-Kugler, C. J., et al. Stereotaksik enjeksiyon yoluyla yüksek titreli CRISPR retro ve Lentivirüslerin tasarımı, paketlenmesi ve teslimi. J. Vis. Uzm. (2016)Bu video, fare beyninde hassas nöronal gen düzenlemesi için stereotaksik viral enjeksiyonu göstermektedir. Protokol, dentat girusa doğru virüs iletimini sağlayarak, nöral devreleri, gen fonksiyonunu ve hastalık mekanizmalarını in vivo olarak incelemek için floresan etiketleme ve CRISPR aracılı gen nakavtını mümkün kılar.

Fare beyninde hedeflenen nöronal gen düzenlemesi için stereotaksik viral enjeksiyon

MicroRNA beyin yapısı ve fonksiyonu önemli rolleri vardır. Burada aşırı ifadesi bir mühendislik miRNA-ifade lentivirüs stereotaktik enjeksiyonu kullanılarak hipokampal miRNA uygulamak için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu yaklaşım, değerlendirmek için nispeten hızlı bir yöntem olarak hizmet...

Bir Stereotaktik Enjeksiyon MicroRNA-ifade Fare Hippocampus CA1 Bölgesi Lentiviruses ve Davranış Sonuç Değerlendirilmesi

Viral vektörler hedefli gen manipülasyonu için izin verir. Bu arka boynuzu içine, bir viral vektör stereotaksik enjeksiyon, birincil somatosensoriyel afferentleri ve merkezi sinir sistemi nöronları arasındaki sinaptik bir temas önemli yer kullanılarak, koşullu gen ekspresyonu ya da fare omurilik ablasyonu için bir yöntem göstermektedir.

Fare Omurilik Koşullu Gen Manipülasyon için bir Viral Vector Stereotaksik Enjeksiyon

Lentivirüsler cDNA'larını ifade eden ya da shRNAs farelerde spesifik beyin bölgelerinde gen ifadesini modüle edebilen stereotaktik enjeksiyon. Burada, biz Açık Alan Testi (OFT) ve Zorla Swim Testi (FST) gibi davranışsal görevleri ile stereotaktik enjeksiyon birleştirmek için bir protokol mevcut.

Stereotaktik Enjeksiyon Tekniği uygulamak Hayvan Davranışları üzerinde Genetik Etkileri Eğitim için

Kemirgenler, davranışın moleküler alt tabakalarını ve karmaşık psikiyatrik bozuklukları araştırmak için uygun bir modeldir. Uyanık kemirgenlerde beyin mikroenjeksiyonu, hastalık substratlarını aydınlatmak için kullanılabilir. Verimli ve özelleştirilebilir bir beyin mikroenjeksiyon yönteminin yanı sıra motivasyonu ölçen edimsel bir paradigmanın yürütülmesi sunulmaktadır.

Kemirgen Beyin Mikroenjeksiyon Moleküler Alt Tabakalar Motive Davranış Eğitim için

Optogenetic yaklaşımlar yaygın nöral aktiviteyi işlemek ve beyin fonksiyonu için sonuçlarını değerlendirmek için kullanılır. Burada, bir teknik optik aktivatör channelrhodopsin in vivo tanımlanması üzerine, korku ile ilgili devreler özel uzun menzilli ve yerel sinirsel bağlantılar sinaptik özellikleri ex vivo analiz için izin verdiği gösterilmiştir.

Beyin Dilimleri Korku Devre Ex Vivo optogenetic Diseksiyon

CRISPR / Cas9 sistemi bilimsel topluluk hedeflenen genom düzenleme erişilebilir ve uygun fiyatlı hale getirmek için potansiyel sunmaktadır. Bu protokol CRISPR / Cas9 sistemi kullanılarak ilgilenilen geni nakavt, sonra yetişkin fare beyninin içine stereotaxically onları enjekte edecektir virüsleri oluşturmak için nasıl göstermek için tasarlanmıştır.

Tasarımı, Ambalaj ve Yüksek Titre CRISPR Retro ve Lentivirüslerden teslimi Stereotaksik enjeksiyon yoluyla

Biz yenidoğan fare beyni striatum microinjecting reaktifler için ev yapımı bir baş-sabit aygıt ile bir protokol stereotaksik cerrahi açıklamak. Bu teknik, yenidoğan fare beyni, özel bölgelerin nöronal hücrelerin genetik manipülasyon sağlar.

Yenidoğan fare beyin Striatal hücrelerdeki genetik manipülasyon için stereotaksik cerrahi

Öğrenin fare beynine viral vektörlerin stereotaksik mikroenjeksiyonu ile koşullu yer tercihi davranışında gen fonksiyonlarını incelemeyi. Bu yöntem bağımlılık ve ödül mekanizmalarını anlamaya yardımcı olur.

Cre Recombinase Kokain Klima yeri tercihi Hedef Genlerin Rolü Eğitim için ifade Viral Vektörler stereotaksik Mikroenjeksiyon

Daha fazla video keşfet