Reações de Ligação de DNA

Na biologia molecular, a ligadura refere-se à junção de dois fragmentos de DNA através da formação de uma ligação fosfodiester. Uma enzima conhecida como ligase catalisa a reação de ligadura. Na célula, as ligass reparam quebras de fios simples e duplos que ocorrem durante a replicação do DNA. Em laboratório, a liga ligase de DNA é usada durante a clonagem molecular para unir fragmentos de DNA de inserções com vetores – moléculas de DNA portadoras que replicarão fragmentos-alvo em organismos hospedeiros.

Este vídeo fornece uma introdução à ligadura de DNA. O princípio básico da ligadura é descrito, bem como um procedimento passo a passo para a criação de uma reação generalizada de ligadura. Aspectos críticos das reações de ligadura são discutidos, como como o comprimento de uma saliência final pegajosa afeta a temperatura de reação e como a razão de inserção de DNA para vetor deve ser adaptada para evitar a autoconteção. Ferramentas moleculares que auxiliam em ligaduras como o Fragmento de Klenow e o linfosfate alcalino de camarão (SAP) são mencionadas, e também são apresentadas aplicações, como ligaduras de proximidade e a adição de linkers a fragmentos para sequenciamento.