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Su larga scala Knockdown Gene in<em> C. elegans</em> Utilizzo di librerie di alimentazione dsRNA per generare fenotipi Robusti Perdita di funzione
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Large-scale Gene Knockdown in C. elegans Using dsRNA Feeding Libraries to Generate Robust Loss-of-function Phenotypes
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Su larga scala Knockdown Gene in<em> C. elegans</em> Utilizzo di librerie di alimentazione dsRNA per generare fenotipi Robusti Perdita di funzione

DOI:
10.3791/50693-v

•

18:38 min

•

September 25, 2013

•

, ,
1Molecular and Cellular Biology Program,University of Massachusetts, Amherst, 2Neuroscience and Behavior Program,University of Massachusetts, Amherst, 3Department of Biochemistry and Molecular Biology,University of Massachusetts, Amherst

Chapters

  • 00:05Title
  • 02:54How to Determine Plasmid Loss
  • 04:32Making Temporary Copies of the Library Omniplates
  • 06:35Preparation of Bacteria for Feeding Worms
  • 09:28Determining the Concentration of L1 Arrested C. elegans Larvae
  • 10:53dsRNA Feeding Screen
  • 12:37Results: Effects of egl-30, dpy-17, pat-10, and unc-4 Knockdown
  • 17:50Conclusion

Summary

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Mentre dsRNA alimentazione in C. elegans è un potente strumento per valutare la funzione del gene, i protocolli attuali schermi di alimentazione su larga scala producono efficienze atterramento variabili. Descriviamo un protocollo migliorato per eseguire larga scala RNAi schermi alimentazione che si traduce in knockdown altamente efficace e riproducibile di espressione genica.

Tags

Keywords: RNA InterferenceRNAiDsRNA FeedingC. ElegansGene KnockdownLoss-of-function PhenotypesHigh-throughput ScreeningPlasmid LossProtocolNeurons

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