Name: Ameliyat sonrası Immunosupressjonun ve Mekanizmaları keşfedin ve Roman Perioperatif İmmünoterapiler Değerlendirmesinde Cerrahi Stres Fare Tümör Modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-12T19:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 37 s
Description: Keşfedin ameliyat sonrası immünosüpresyon mekanizmalarını ve perioperatif immünoterapilerin etkinliğini fare tümör modeli kullanarak. Bu yöntem cerrahi stresin metastaz üzerindeki etkisini azaltmada immünoterapi potansiyelini gösterir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar hayvan ameliyatları ile yardım için Kim Yates, Eileen Franklin ve Rebecca Tjepkema (Hayvan Bakım ve Veterinerlik Hizmetleri, Ottawa Üniversitesi) teşekkür etmek istiyorum. Lee-Hwa Tai bir Fonds de recherche sante Quebec Bursu tarafından desteklenmektedir. Rebecca Auer Lider&#39;in Fırsat Grant - Bu çalışma Kanada Kanser Topluluğu Araştırma Enstitüsü Yenilik Grant, Araştırma ve Geliştirme Erken Araştırmacı Ödülü Ontario Bakanlığı, Yenilik ve Kanadalı Vakfı faaliyet hibe tarafından desteklenmiştir.

1.. In vitro olarak tümör 4T1 hücreleri korumak <ol><li> Bitmiş DMEM içinde kültür 4T1 modifiye edilmemiş tümör hücreleri (DMEM,% 10 FBS, 1 x penisilin / streptomisin yok), 10 cm doku kültür plakaları içinde. 37 ° C,% 5 CO2 doku kültürü inkübatöründe inkübe edin. </li><li> Bölünmüş kültürleri 2-3 kez / hafta. Optimum yaşayabilirliği Hücreler% 80 izdiham aşmamalıdır korumak için. Kültürler&gt; 1 ay boyunca in vitro pasajlanmışlardır edilmiş ise bu daha erken pasajlanır hücrelerden daha malignite ve metastatik potansiyel azalır gibi in vivo primer tümörleri kurulması için hücreler kullanmayın. </li></ol> 2. Enjeksiyon için Hasat 4T1 Tümör Hücreleri <ol><li> Bir Pasteur pipeti kullanılarak doku kültürü plakasının aspire kültür ortamı. </li><li> 2 ml EDTA ihtiva eden steril PBS 1x 10 ml ilave edilir. PBS çözeltisi, 37 ° C&#39;de, 5-7 dakika boyunca% 5 CO2 doku kültürü inkübatöründe de bir plaka içerisinde inkübe olsun. </li><li> Plaka, r Hasat PBS çözümçözeltisi ile plaka 2-3x insing, 15 ml konik tüp aktarın. </li><li> Bir tezgah üstü santrifüj içinde 4 ° C&#39;de 500 x g&#39;de 5 dakika için, hücreler santrifüj. </li><li> Süpernatan aspire ve serumsuz DMEM hücre pelletini. </li><li> Bir hücre sayacı kullanarak hücre konsantrasyonunu belirleyin. </li><li> Buz üzerinde enjeksiyon yeri ve hücreler için 6 cells/500 ul (1x10 5 s/50 ul (1x10 için serum içermeyen ortam ile hücrelerin seyreltin. </li></ol> 3. 4T1 hücreleri ile tümör enjekte Mice Gerçekleştirilen tüm hayvan çalışmaları kadavradan enjeksiyonları ya da tümör implantlar alan tüm hayvanlar için Ottawa önerilerin Üniversitesi Hayvan Bakımı Veteriner Hizmetleri, kurumsal kurallarına uygun idi. <ol><li> Buprenorfin (0.05 mg / kg), ağrı yönetimi için ameliyattan önce 1 saat ile deri altından fareler davranın. </li><li> Tetikleyebilecek ve enjeksiyon süresi boyunca% 2.5 izofluran ile anestezi altında fare korumaktion. Refleks tepki algılamak için fare Kapkaççı çimdik. Hiçbiri tespit edilirse, etkili anestezi seviyeleri ulaşılır. Yağlayıcı madde bundan sonra steril göz kornea kurumasını önlemek için uygulanır. </li><li> 30 G yükleyin ½ hücreleri süspansiyon tam 50 ul &quot;Ultra-ince&quot; Şırınga içinde. , Tüm hava kabarcıkları hava kabarcıklarını çıkarmak için şırınganın yan dokunarak şırınga sütundan çıkarılır emin olun. </li><li> Ventral yüzü (anestezi altında) fare yerleştirin. </li><li> Bir alkol çubukla kullanarak enjeksiyon bölgesini temizleyin ve 4 meme yağ yastığı içine yatay ve doğrudan iğne tanıtmak, yavaş yavaş şırınga hacminin dağıtımı. </li><li> Olası sızıntıyı temizlemek için pamuklu çubuk kullanın. </li><li> Fareler anestezi kurtarmak için izin verin. </li><li> Buprenorfin ağrı yönetimi uygulanabilir sc 2 gün süre ile her 8 saat için (0.05 mg / kg) koruyun. </li></ol> 4. BALB / c Fare Rulman 4T1 Tümör Perioperatif Tedavi Yönetme <ol><li> 13 gün sonrası tümör hücre enjeksiyonu de, harici bir kumpas kullanılarak primer tümör ölçmek. Çap pergeli ile en büyük uzunlamasına çapı (boy) ve en büyük enine çapı (en) ölçün. Modifiye edilmiş elipsoid formülü tümör hacmi hesaplamak için kullanılır (tümör hacmi = 1/2 (uzunluk, genişlik 2) </li><li> 13 gün sonrası tümör hücre enjeksiyonu anda, primer tümör yaklaşık 1 cm 3 ölçmek gerekir. Bu tümör ölçümü elde edildiğinde, perioperatif tedavi reaktifi hazırlayın. </li><li> Onkolitiktir virüs bir perioperatif dönemde yönetebileceğiniz bir yenilikçi tedavi edilir. Enjeksiyondan önce buz üzerinde 1x steril PBS ve yerine onkolitik virüs (1x10 9 PFU / 1 ml) hazırlayın. </li><li> Güvenli ve yer fareintravenöz kuyruk ven enjeksiyon için süzgeç içine. </li><li> Yavaşça lateral kuyruk damarları görselleştirmek için ılık musluk suyu fare kuyruğu ısı. </li><li> 27 G Yük ½ &quot;İnsülin Şırınga&quot; in Onkolitik virüs tedavisi tam 100 ul. Tüm hava kabarcıkları şırınga sütununda kaldırılır emin olun. </li><li> Lateral kuyruk damarlar birine 1x10 8 PFU/100 ul / fare fare ile enjekte edilir. İğne uygun bir yan damar içine takılırsa şırınga karartıcı zaman, hiçbir direnç keçe olmalıdır. </li></ol> 5. Primer tümör ve karın sol nefrektomi komple rezeksiyonu <ol><li> 14 gün sonrası tümör hücre enjeksiyonu anda, Ottawa Hayvan Bakım ve Veteriner Servisi Üniversitesi onaylanan protokollerde aşağıdaki rutin perioperatif başlatmak. Buprenorfin (0.05 mg / kg), ağrı yönetimi için ameliyattan önce 1 saat ile deri altından fareler davranın. Neden ve ameliyat sırasında% 2.5 izofluran kullanılarak anestezi korumak. Under koşulları ve steril cerrahi aletler kullanarak sterilize, cerrahi alan traş ve kotarılmış. Hayvanlar ameliyat öncesi deri altı sıvıları ve göz yağ tatbik edilmektedir. </li><li> Yavaşça ve tamamen meme yağ pedi birincil 4T1 tümör kaldırmak için, küçük bir kesik (1-2 cm uzunluğunda) olun. </li><li> 02-03 Eylül mm zımba ile kesi kapatın. </li><li> Fare ventral orta hat boyunca deri ve deri altı tabakası ile kesim tarafından karın Açığa. </li><li> Fare peritonunu erişmek için linea alba (3-4 cm) bir kesi olun. </li><li> Tarafına örten bağırsakları hareket ettirerek karın sol iç tarafını ortaya. Bağırsaklar tuzlu ıslatılmış steril gazlı bez ile nemli tutulur emin olun. </li><li> Cerrahi forseps bir künt çifti kullanarak, yavaşça sol böbrek kavramak. </li><li> Bir döngü içine bağlı bir 3-0 balmumu kaplı örgülü ipek sütür kullanılarak, sol böbrek hilusu Arter ve 3 cerrahi knot ile sabitleyin. Surgi ile sol böbreğical makas. </li><li> Yeterli hemostaz elde emin olmak için dikkatlice dikiş kravat inceleyin. </li><li> 9 mm zımba kullanarak 5-0 örgülü emilebilir, ardından zımba cilt katmanı kullanarak sürekli bir döngü dikiş ile cilt altı katmanı kapatın. 5,2-5,10 10 dk / hayvan gerektiren gereken adımlar. </li><li> Buprenorfin ağrı yönetimi uygulanabilir sc 2 gün süre ile her 8 saat için (0.05 mg / kg) koruyun. </li></ol> 6. Euthanizing Fareler ve İşleme ve Akciğer Tümör Yükü Kantitasyonu <ol><li> 4T1 tümör enjeksiyonundan sonrası 28 günde, Ottawa Üniversitesi Hayvan Bakım ve Veterinerlik Hizmetleri protokole göre fareler euthanize. </li><li> % 70 etanol ile fareyi aşağı Sprey. </li><li> Sadece göğüs kafesinin altında bir makas ile ilk kesi olun. </li><li> Fare göğüs boşluğunun ventral orta hat boyunca deri ve deri altı tabakasının içinden keserek göğüs Açığa. </li><li> NE her tarafı yukarı deri ve doku ile yanal kesiler yapmakfare ck. </li><li> Akciğerler üstünde ve altında bağ dokusu kırpma sırasında hafifçe akciğer tutarak akciğerleri parçalara ayır. </li><li> Hammaddesi,% 10 tamponlu formalin içine yerleştirmek, sonra kalıntı kan temizlemek için soğuk PBS akciğer ekstre edilmiştir. </li><li> Tümör metastaz değerlendirilmesi için her akciğeri fotoğraf. Tümör yükü ölçümü için akciğerlere tartılır. </li></ol>

<ol><li>Tai, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preventing+postoperative+metastatic+disease+by+inhibiting+surgery-induced+dysfunction+in+natural+killer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Preventing postoperative metastatic disease by inhibiting surgery-induced dysfunction in natural killer cells.</a> Cancer Res. 73, 97-107 (2013).</li>
<li>Seth, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+Stress+Promotes+the+Development+of+Cancer+Metastases+by+a+Coagulation-Dependent+Mechanism+Involving+Natural+Killer+Cells+in+a+Murine+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Surg%22%5BJournal%5D)">Surgical Stress Promotes the Development of Cancer Metastases by a Coagulation-Dependent Mechanism Involving Natural Killer Cells in a Murine Model.</a> Ann. Surg. , (2012).</li>
<li>Shakhar, G., Ben-Eliyahu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+prophylactic+measures+against+postoperative+immunosuppression%3A+could+they+reduce+recurrence+rates+in+oncological+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Surg.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Potential prophylactic measures against postoperative immunosuppression: could they reduce recurrence rates in oncological patients.</a> Ann. Surg. Oncol. 10, 972-992 (2003).</li>
<li>Shiromizu, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+laparotomy+and+laparoscopy+on+the+establishment+of+lung+metastasis+in+a+murine+model%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Effect of laparotomy and laparoscopy on the establishment of lung metastasis in a murine model.</a> Surgery. 128, 799-805 (2000).</li>
<li>Tsuchiya, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+surgical+stress+promotes+tumor+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Increased surgical stress promotes tumor metastasis.</a> Surgery. 133, 547-555 (2003).</li>
<li>Lanier, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NK+cell+recognition%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">NK cell recognition.</a> Annu. Rev. Immunol. 23, 225-274 (2005).</li>
<li>Espi, A., Arenas, J., Garcia-Granero, E., Marti, E., Lledo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+of+curative+surgery+on+natural+killer+cell+activity+in+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Dis.+Colon+Rectum%22%5BJournal%5D)">Relationship of curative surgery on natural killer cell activity in colorectal cancer.</a> Dis. Colon Rectum. 39, 429-434 (1996).</li>
<li>Pollock, R. E., Lotzova, E., Stanford, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+of+surgical+stress+impairment+of+human+perioperative+natural+killer+cell+cytotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Surg%22%5BJournal%5D)">Mechanism of surgical stress impairment of human perioperative natural killer cell cytotoxicity.</a> Arch. Surg. 126, 338-342 (1991).</li>
<li>Pollock, R. E., Lotzova, E., Stanford, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+stress+impairs+natural+killer+cell+programming+of+tumor+for+lysis+in+patients+with+sarcomas+and+other+solid+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Surgical stress impairs natural killer cell programming of tumor for lysis in patients with sarcomas and other solid tumors.</a> Cancer. 70, 2192-2202 (1992).</li>
<li>Ben-Eliyahu, S., Page, G. G., Yirmiya, R., Shakhar, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+that+stress+and+surgical+interventions+promote+tumor+development+by+suppressing+natural+killer+cell+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Evidence that stress and surgical interventions promote tumor development by suppressing natural killer cell activity.</a> Int. J. Cancer. 80, 880-888 (1999).</li>
<li>Page, G. G., Blakely, W. P., Ben-Eliyahu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+that+postoperative+pain+is+a+mediator+of+the+tumor-promoting+effects+of+surgery+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Evidence that postoperative pain is a mediator of the tumor-promoting effects of surgery in rats.</a> Pain. 90, 191-199 (2001).</li>
<li>Glasner, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+survival+rates+in+two+models+of+spontaneous+postoperative+metastasis+in+mice+by+combined+administration+of+a+beta-adrenergic+antagonist+and+a+cyclooxygenase-2+inhibitor%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Improving survival rates in two models of spontaneous postoperative metastasis in mice by combined administration of a beta-adrenergic antagonist and a cyclooxygenase-2 inhibitor.</a> J. Immunol. 184, 2449-2457 (2010).</li>
<li>Benish, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perioperative+use+of+beta-blockers+and+COX-2+inhibitors+may+improve+immune+competence+and+reduce+the+risk+of+tumor+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Surg.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Perioperative use of beta-blockers and COX-2 inhibitors may improve immune competence and reduce the risk of tumor metastasis.</a> Ann. Surg. Oncol. 15, 2042-2052 (2008).</li>
<li>Goldfarb, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+postoperative+immune+status+and+resistance+to+cancer+metastasis%3A+a+combined+perioperative+approach+of+immunostimulation+and+prevention+of+excessive+surgical+stress+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Surg%22%5BJournal%5D)">Improving postoperative immune status and resistance to cancer metastasis: a combined perioperative approach of immunostimulation and prevention of excessive surgical stress responses.</a> Ann. Surg. 253, 798-810 (2011).</li>
<li>Tartter, P. I., Steinberg, B., Barron, D. M., Martinelli, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+prognostic+significance+of+natural+killer+cytotoxicity+in+patients+with+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Surg%22%5BJournal%5D)">The prognostic significance of natural killer cytotoxicity in patients with colorectal cancer.</a> Arch. Surg. 122, 1264-1268 (1987).</li>
<li>Fujisawa, T., Yamaguchi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autologous+tumor+killing+activity+as+a+prognostic+factor+in+primary+resected+nonsmall+cell+carcinoma+of+the+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Autologous tumor killing activity as a prognostic factor in primary resected nonsmall cell carcinoma of the lung.</a> Cancer. 79, 474-481 (1997).</li>
<li>Guillot, B., Bessis, D., Dereure, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mucocutaneous+side+effects+of+antineoplastic+chemotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin.+Drug+Saf%22%5BJournal%5D)">Mucocutaneous side effects of antineoplastic chemotherapy.</a> Expert Opin. Drug Saf. 3, 579-587 (2004).</li>
<li>Deehan, D. J., Heys, S. D., Ashby, J., Eremin, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-2+%28IL-2%29+augments+host+cellular+immune+reactivity+in+the+perioperative+period+in+patients+with+malignant+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Surg.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Interleukin-2 (IL-2) augments host cellular immune reactivity in the perioperative period in patients with malignant disease.</a> Eur. J. Surg. Oncol. 21, 16-22 (1995).</li>
<li>Houvenaeghel, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tolerance+and+feasibility+of+perioperative+treatment+with+interferon-alpha+2a+in+advanced+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+Surg%22%5BJournal%5D)">Tolerance and feasibility of perioperative treatment with interferon-alpha 2a in advanced cancers.</a> Int. Surg. 82, 165-169 (1997).</li>
<li>Klatte, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perioperative+immunomodulation+with+interleukin-2+in+patients+with+renal+cell+carcinoma%3A+results+of+a+controlled+phase+II+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Perioperative immunomodulation with interleukin-2 in patients with renal cell carcinoma: results of a controlled phase II trial.</a> Br. J. Cancer. 95, 1167-1173 (2006).</li>
<li>Oosterling, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perioperative+IFN-alpha+to+avoid+surgically+induced+immune+suppression+in+colorectal+cancer+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Histol.+Histopathol%22%5BJournal%5D)">Perioperative IFN-alpha to avoid surgically induced immune suppression in colorectal cancer patients.</a> Histol. Histopathol. 21, 753-760 (2006).</li>
<li>Tai, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perioperative+influenza+vaccination+reduces+post-operative+metastatic+disease+by+reversing+surgery-induced+dysfunction+in+natural+killer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Perioperative influenza vaccination reduces post-operative metastatic disease by reversing surgery-induced dysfunction in natural killer cells.</a> Clin Cancer Res. , (2013).</li>
</ol>

Yazarlar herhangi bir mali çıkarlarını beyan.

Cerrahi rezeksiyon lokalize katı malignitesi olan hastalar için tedavinin dayanak noktası. Hatta tam rezeksiyon ile, birçok hasta metastatik nüks geliştirmek ve sonuçta hastalık nedeniyle ölmektedir. Ameliyattan hemen sonra ameliyat sonrası dönem NK hücresi bastırma ile büyük ölçüde modüle kanser metastaz oluşumu, için ideal bir ortam sağlar. Buna rağmen, büyük ölçüde göz ardı edilir bir terapötik pencere kalır. Postoperatif metastazı önlemeyi amaçlayan hiçbir standart perioperatif anti-kanser tedavileri bulunmamaktadır. Mevcut sorun, böylece mikrometastatik hastalığın kurulmasını engelleyen perioperatif dönemde NK hücrelerini aktive edecek, güvenli ve umut verici tedavilerin tespit etmektir. Bu tedaviler titizlikle preklinik hayvan modellerinde güvenlik ve etkinlik için karakterize ve sonra düşünceli tasarlanmış klinik çalışmalarda tercüme edilmelidir. Birincil oranıcerrahi stres bir fare tümör modeli geliştirme nale cerrahi sonrası bağışıklık bastırma ve metastatik yayılım mekanizmalarını keşfetmek ve primer tümörü çıkarmak için ameliyat geçiren, kanser hastalarında gelecekteki kullanım için potansiyeli olan yenilikçi immünoterapiler değerlendirmektir. Bu amacı gerçekleştirmek için, cerrahi stres ile birleştiğinde bir 4T1 kemirgen meme kanseri modeli geliştirilmiştir. 4T1 hücre çizgisi bir kemirgen &quot;meme kanseri&quot; olsa da, bu hücre hattı kullanmak için neden bize gerçekçi kanseri modelinde cerrahi stresin etkilerini değerlendirmek olanak spontan metastaz uyarlık olduğunu. Bu bağlamda, malignite gerçek köken metastatik potansiyelini ve tümör biyolojisi daha az önemlidir. Bizim modelin ikinci önemli bileşeni yakın insan kanser ameliyatı andıran bir hayvan cerrahi işlemin gelişmedir. 1 cm 3 ulaşır sonra bu hayvan cerrahi stres modelinde, birincil 4T1 meme tümör eksize edilir. Çünküİnsan kanser hastalarında cerrahi önemli bir bağışıklık bastırma, &quot;ameliyat stres&quot; tedavi gruplarında açık bir karın nefrektomi içeren ek gerçekleştirilir. Insanlarda daha geleneksel tümör rezeksiyonu ile karşılaştırır gibi, tam bir sol nefrektomi invaziv kolorektal kanseri, yumurtalık kanseri, böbrek kanseri, pankreas kanseri, akciğer ve yemek borusu cerrahisi dahil olmak üzere katı maligniteler için cerrahi tedavi çok sayıda türleri, çok karşılaştırılabilir kanseri. Buna ek olarak, biz laparotomi + nefrektomi nedeniyle perioperatif meydana derin fizyolojik değişiklikler, yeterince en sağlam malinitelerin invaziv cerrahi sonrası ortaya ezici fizyolojik değişiklikleri üretir iddia ediyorum. Aşırı cerrahi stres ve ölümlülük, anestezi süresi ve cerrahi yol ve ameliyat sırasında vücut ısısını korumak olabilir perioperatif faktörleri kontrol etmek için tam olarak tanımlanır. Tüm bu parametreler tam bir yürütülürd insan kanser hastalarında rutin perioperatif ayna bizim cerrahi protokolde tanımlanmış. Perioperatif tedavi zamanlaması perioperatif kurtarma modeli için ek bir önemli bileşenidir. 4T1 tümör taşıyan farelere önce influenza aşısının 3 rejimleri ile muamele edilmiştir: Neoadjuvant (ameliyattan önce 5 gün verilir), ameliyat sırasında (cerrahi aynı günde verilir) ve cerrahi gününde verilen perioperatif + dozlu (bunu takiben de 2 Ek doz) 5 gün arayla verilmedi. Dikkate değer, aşı tedavisi 3 modları anlamlı akciğer metastazları, 22 azalmıştır. Ancak, influenza aşısı en etkili bir şekilde tek bir doz, düşük metastaz olarak perioperatif olarak verilir. Topluca, bu deneyler metastatik sürecine müdahale için dar bir terapötik pencere olarak hemen perioperatif dönemin önemini vurgulamak. Böyle oncoly gibi yenilikçi immunoterapilerin perioperatiftik virüs aşıları ve münhasıran araştırma grubu ile sınırlı kalmıştır. Bu yeni onkolitik ORF ve ineklerdeki çiçek hastalığı virüsleri, perioperatif uygulanması hayvan modellerinde 1 &#39;de ameliyat sonrası NK hücresi bastırma ters ilk defa burada gösterilmektedir. Daha da önemlisi, bağışıklık fonksiyonunun bu kurtarma metastaz postoperatif oluşumunda bir azalma ile ilişkilidir. Insan çalışmalarında, ameliyat sonrası kanser cerrahi hastalarının NK hücre toksisitesini azalmıştı ve perioperatif OV belirgin kanser hastalarında 1 NK hücre aktivitesini artırır. Ticari olarak temin edilebilen profilaktik aşılar kullanılarak, perioperatif influenza aşısı yönetim önemli ölçüde tümör metastazı azalır ve klinik öncesi modellerde tümör NK hücre sitotoksisitesini iyileştirdiğini göstermektedir. İnsan çalışmalarda, influenza aşısı önemli Sağlıklı insan donörlerden ve kanser hastalarında cerrahi 22&#39;de NK hücre aktivitesini geliştirdi. Birçok yaklaşımlar Canc azaltmak için kullanılırKemoterapi ve radyasyon, ancak bu tedavilerin de dahil olmak üzere er nüks genellikle (neoadjuvan) önce veya (adjuvan) cerrahi sonrası aylar hafta uygulanır. Bu alanda yapılan araştırmalar erken postoperatif dönemi uzun vadeli tümör nüks oranlarının belirlenmesinde kritik olduğunu göstermektedir. Bu nedenle, bu kritik dönemde immunoterapilerin şeklinde klinik müdahaleler önemli uzun vadeli faydalar olabilir. Spontan akciğer metastazı ve cerrahi stres bir fare modeli kullanılarak çalışmalarımız yeni tedaviler keşfetmek ve kanser cerrahisi hastalarında perioperatif immünosupresyonu önlemek ve böylece de kanser nüks oranlarını azaltmak için kendi potansiyelini belirlemek için eşsiz bir fırsat sunmaktadır.

Cerrahi solid tümörlerin küratif kanser tedavisinde önemli bir bileşeni olduğunu, ama tam rezeksiyon rağmen, birçok hasta metastatik nüks geliştirmek ve sonuçta hastalık nedeniyle ölmektedir. Giderek, ameliyat sonrası süre, kan pıhtılaşması, büyüme faktörleri serbest bırakılması, ve bağışıklık kaybı da dahil olmak üzere cerrahi fizyolojik stres tepkisi, bir sonucu olarak, metastaz gelişimi için önemli bir zaman olarak kabul edilmektedir. Bizim grup 1,2 ve diğerleri 3-5 ameliyattan hemen sonraki süre metastaz oluşumu için benzersiz bir zaman duyarlı olduğunu göstermiştir. Cerrahi prometastatic etkilerinden sorumlu en önemli mekanizmalardan biri, doğal katil (NK) hücreler, 1-3 ameliyat sonrası işlev bozukluğudur. NK hücreleri, tümör büyümesi ve metastaz 6 kontrolünde dahil olan doğuştan gelen bağışıklık sistemi sitotoksik lenfositlerdir. Ameliyat sonrası NK hücre fonksiyon bozukluğu i belgelenmiştirn insan hasta 1,7-9 ve hayvan modellerinde hem de 1,10,11. Insan çalışmalarında, perioperatif dönemde düşük NK aktivitesi kanser nüksü ve mortalite 15,16 daha yüksek bir oranı ile ilişkili iken ameliyat sonrası NK hücre bastırma, spontan ve implante metastaz 1,11-14 hayvan modellerinde artmış metastaz ile ilişkilidir. Buna rağmen, özellikle hemen kanser cerrahisi sonrası meydana prometastatic değişiklikleri ele hiçbir kanser tedavileri şu anda var. Perioperatif süresi metastatik sürecine müdahale için hangi bir terapötik fırsat penceresi temsil eder. Bu tür sitotoksik kemoterapi gibi geleneksel kanser tedavileri, büyük cerrahi sonrası iyileşme 17 hastalara tatbik edilmesi için çok toksik olarak kabul edilir olsa da, bağışıklık tedavileri perioperatif uygulama için ideal adaylardır. Rekombinant IL-2 ve IFN-Î ³ perioperatif kullanımı i araştırılmıştırn Erken evre ameliyat sonrası NK hücre baskılanmasını önlemek ve progresyonsuz sağkalım 18-21 geliştirmek için kendi potansiyelini gösteren klinik çalışmalar. Ne yazık ki, daha da geliştirilmesi büyük bir ameliyat 17 ile birleştirilir, bu non-spesifik sitokin tedavinin tolere tarafından engellenmiştir. Virüsler de NK hücrelerinin güçlü özel olmayan aktivatörleridir. Araştırmamız daha önce bu yeni anti-kanser onkolitik virüs (OV) ve bu influenza aşısı gibi aşılar viral replikasyon yapmayan olarak taklit eden virüsler, ameliyat öncesi uygulama ameliyat kaynaklı NK hücre faaliyetinin bozukluğu, inhibe etmek ve metastatik hastalık 1,22 azaltmak olduğunu göstermiştir. Bu yazıda anlatılan cerrahi modeli ameliyattan sonra tümör hücrelerinin yayılmasını ve büyüme ile ilgili mekanizmaların anlayışımızı kolaylaştırdı ve bize perioperatif dönemde uygulanabilir yeni hedefli tedaviler keşfetmek için izin verdi. Bu amacı gerçekleştirmek için, bir hayvangelişen cerrahi stres ve spontan metastaz tomar modeli. Kendiliğinden akciğerler, özellikle birden fazla uzak siteler için birinci meme bezinden metastaz edebiliyoruz - modeli fare meme karsinoma tümörü (4T1 BALB / c) &#39;nin kullanımını sağlar. 0. günde, göğüs kanseri hücreleri, fare meme yağ tabanına implante edilir. 14. gün, tümör implantasyonu olarak, primer meme tümör tam bir rezeksiyon bütün hayvanlarda gerçekleştirilir. Hayvanların bir alt karın nefrektomi şeklinde ek cerrahi stres alır. 28. günde, akciğer tümörü nodüller ameliyatla vurguladı ve karşılaştırıldığında hiçbir cerrahi kontrol fareler izole ve ölçülür. Kanser ve cerrahi bu hayvan modelinde, kanser metastazları üzerine cerrahinin etkileri incelenmiştir ediliyor ve viral bazlı bağışıklık uyarıcılar kopyalayan ve replikasyon gibi yenilikçi imünoterapiler, perioperatif yönetim etkinliği ilk kez test edilir.

<table><tbody><tr><td>Dulbecco'nun Modifiye Kartal Ortamı (DMEM)</td> <td>Corning Cell-Gro</td><td>10-013-CV</td><td></td></tr><tr><td>İnaktive Fetal Sığır Serumu (FBS)</td> <td>HyClone</td><td>SH30396.03</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin / Streptomisin</td><td>Gibco</td><td>15070-063</td><td></td></tr><tr><td>1x Steril Fosfat Tamponlu Salin (PBS)</td> <td>Corning Cell Gro</td><td>21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfin</td><td>Chiron, Guelph</td><td></td><td></td>RXN309968</tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Baxter Corp</td><td>1001936040</td><td></td></tr><tr><td>1/2 Ultra ince şırınga</td><td>Terumo</td><td>30 G, SS05M3009</td><td></td></tr><tr><td>9 mm Staples</td><td>Braintree</td><td>ACS BX</td><td></td></tr><tr><td>5-0 Örgülü emilebilir sütür</td><td>Covidien</td><td>UL-202</td><td></td></tr><tr><td>3-0 Balmumu örgülü ipek sütür</td><td>Covidien</td><td>S-194</td><td></td></tr><tr><td>Formalin</td><td>Fisher</td><td>SF100-20</td><td></td></tr><tr><td>4T1 Tümör hücreleri</td><td>ATCC</td><td>CRL-2539</td><td></td></tr><tr><td>BALB/c fareler</td><td>Charles Rivers</td><td>Labs Suş Kodu: 028</td><td></td></tr></tbody></table>

ameliyat sonrası immunosupressjon&#39;un ve mekanizmaları keşfedin ve roman perioperatif İmmünoterapiler değerlendirmesinde cerrahi stres fare tümör modeli

A Mouse Tumor Model of Surgical Stress to Explore the Mechanisms of Postoperative Immunosuppression and Evaluate Novel Perioperative Immunotherapies

Cerrahi rezeksiyon çok kanserli hastalar için önemli bir tedavi, ancak ameliyat bağışıklık sistemi bozukluğu neden olur ve bu, hayvan modellerinde ve kanserli hastalarda metastatik hastalık gelişimi ile bağlantılı olmuştur. Grubumuzun ve diğerlerinden preklinik çalışma doğuştan gelen bağışıklık fonksiyonu, postoperatif dönemde özellikle NK hücreleri derin bastırılmasını gösterdi ve bu ameliyat sonrasında metastaz gelişmiş gelişiminde önemli bir rol oynar. Nispeten az sayıda hayvan çalışmaları ve klinik çalışmalar karakterize ve kanser cerrahisi zararlı etkilerini tersine odaklanmıştır. Kendiliğinden metastaz yapan tümörlerin ve cerrahi stres sıkı bir hayvan modelini kullanarak, akciğer metastaz gelişimi, kanser cerrahi iyileştirme gösterilmiştir. Bu modelde, 4T1 göğüs kanseri hücreleri, fare meme yağ tabanına implante edilir. 14. gün, tümör implantasyonu olarak, primer meme tümör tam bir rezeksiyon performe olduğuTüm hayvanlarda d. Hayvanların bir alt karın nefrektomi şeklinde ek cerrahi stres alır. 28. günde, akciğer tümör nodülleri nicelendirilir. Immünoterapi hemen ameliyat öncesi verildiğinde, ameliyat sonrası metastaz gelişimini önlemiş bağışıklık hücrelerinin derin bir aktivasyon tespit edildi. 4T1 göğüs tümör cerrahisi modeli tümör metastaz abdominal cerrahi stres etkilerinin simülasyonu için sağlar, diğer tümör türleri uygulanabilirliği test edilmesi gerekmektedir. Mevcut sorun preklinik fare modellerinde güvenli ve umut verici immünoterapiler belirlemek ve metastatik hastalığın tekrarını önlemek için kanser cerrahisi hastalara verilecek uygulanabilir perioperatif tedavilerin içine çevirmek için.

Akciğer metastaz dramatik geliştirilmesi ile sonuçlanan bir cerrahi stres tekrarlanabilir fare modeli geliştirilmiştir. Gün 28 görevde 4T1 tümör aşılama (ve 14 gün tümör rezeksiyonu + / yayınlamak - abdominal nefrektomi), akciğerler hasat ve metastaz için görüntülenmiştir. Cerrahi açıkça akciğer fotoğrafların (Şekil 1A), akciğer nodüllerin sayımı (Şekil 1 B) ve akciğer ağırlığı (Şekil 1 C) ile gösterildiği gibi, tedavi edilmemiş fareler ile karşılaştırıldığında akciğer metastaz miktarını artırır. Onkolitiktir virüs ve inaktif influenza aşısı kopyalayan preoperatif uygulamasının önemli ölçüde kanser cerrahisi prometastatic etkilerini (Şekil 1A-C) kurtarır. NK hücreleri, metastaz sonrası aşı tedavisi önlenmesinde bir aracı rolü olmadığını belirlemek için, NK hücreleri, farmasötik olarak tümör metastazı modelinde anti-asiolo-GM-1 ile tüketildi. NK yokluğundaHücreler, biz perioperatif immünoterapilerin terapötik etkisinin bir ortadan kaldırma (Şekil 2A ve 2B) görülmektedir. Bu veriler cerrahi stres modelinde tümör metastaz giderme temel olarak NK hücrelerinin onkolitik virüs grip aşısı aktivasyon ve takip eden NK aracılı tümör lizis aracılık olduğunu göstermektedir. Daha fazla onkolitik virüs grip aşısı perioperatif uygulanmasından sonra NK hücresi fonksiyonunu karakterize etmek için, ex vivo NK hücre öldürme değerlendirildi. Kısaca, bir araya getirilmiş ve kriteri DX5 + NK hücrelerinin splenositlerinden cerrahi stresli ve kontrol fare izole edilmiştir. Bunlar, bir gama sayacı ile yüzer krom Yayım ölçülmesi ile takip oranları, hedef farklı efektör, krom etiketli YAC-1 hedef hücrelere birlikte 4 saat boyunca kültüre edilmiştir. Onkolitik virüs ve iltihaplanma perioperatif uygulanmasından sonra NK öldürmenin önemli bir iyileşme yanı sıra NK hücre sitotoksisite belirgin bir cerrahi kaynaklı kusuruenza aşı, tek başına cerrahi ile karşılaştırıldığında (Şekil 2C ve 2D) gözlenmiştir. Birlikte ele alındığında bu sonuçlar, ameliyat NK hücresi bastırma başarılı bir şekilde tedavi edilebilir ve metastatik hastalık yeni immünostimülatör tedaviler ile azalttığını göstermektedir. <img alt="Şekil 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51253/51253fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51253/51253fig1.jpg" /> Şekil 1. Akciğer metastazı temsil akciğerlerin (A) fotoğraflar, (B), akciğer tümörü sayım ile belirtilen tedavi gruplarının 28. günde 4T1 akciğer tümör metastazı. Değerlendirilmesi cerrahi kaynaklı geliştirme karşı perioperatif tedavi olarak yeni anti-kanser onkolitik virüs ve influenza aşısı nodüller ve (C) akciğer ağırlıkları. Veriler, bitiş ile 3 benzer bir deneyi temsil etmektedir, n = 5-10/group (*, p = 0.01; **, p &lt;0.0001;<html> ns) anlamlı değil. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51253/51253fig1highres.jpg" target="_blank">, bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 2," fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51253/51253fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51253/51253fig2.jpg" /> Şekil 2. Cerrahi stres NK hücrelerini bozarak akciğer tümör metastazı arttırır. (A, B) akciğer tümör metastazı miktarının yeni cerrahi ameliyat ile tedavi fareler vurgulamıştır. (C, D) cerrahi olarak saflaştırılmış DX5 + NK hücrelerinin yeteneği stresli ve tümör hücrelerini öldürmek için muamele edilmemiş kontrol eder. T oranları: Belirtilen E için üç kopya halindeki gözlerin krom salınım - (SD + /) veriler ortalama yüzdesi olarak gösterildi. . Veriler 3 &#39;e benzer deneyler n = 4-5/group (, **, p &lt;0.005; ns, anlamlı değil *, p = 0.01) arasında temsilcisi/ Www.jove.com/files/ftp_upload/51253/51253fig2highres.jpg &quot;target =&quot; _blank &quot;&gt; bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için buraya tıklayınız.

Cerrahi stres bir fare tümör modeli postoperatif immün baskılanması metastatik hastalık teşvik nasıl keşfetmek ve ımmunostımulator perioperatif tedavilerin değerlendirilmesi için kullanılır.

Ameliyat sonrası Immunosupressjon&#39;un ve Mekanizmaları keşfedin ve Roman Perioperatif İmmünoterapiler Değerlendirmesinde Cerrahi Stres Fare Tümör Modeli

Surgical resection is an essential treatment for most cancer patients, but surgery induces dysfunction in the immune system and this has been linked to ...

Bu prosedürün genel amacı, perioperatif dönemde uygulanan immünoterapinin metastazı azaltma üzerindeki etkisini bir tümör ve cerrahi stres fare modelinde gözlemlemektir. Bu işlem, öncelikle bir primer tümör oluşturmak amacıyla farelerin meme yağ pedine dört T1 tümör hücresi enjekte edilerek gerçekleştirilir. Kanser cerrahisinden bir gün önce, yani 13. günde immünoterapi uygulanır; bu terapinin, tümör hücresi implantasyonundan sonraki 14. günde postoperatif metastatik hastalığı hafifleteceği hipotez edilmektedir.Primer tümör rezeke edilir ve ardından farelerin bir kısmına abdominal nefrektomi şeklinde ek cerrahi stres uygulanır. Son adım, tüm farelerin sakrifiye edilmesi ve akciğerdeki metastatik tümör nodüllerinin sayısının belirlenmesidir. Nihayetinde, spontan metastazlar ve cerrahi stresin bu fare modeli, perioperatif immünoterapinin faydalı etkisini göstermek için kullanılır.Bu yöntem, büyük cerrahi müdahalelerin bağışıklık sistemi üzerindeki ve sonuç olarak ameliyat sonrası dönemde metastatik hastalığın oluşumu üzerindeki etkileri ile immünoterapilerin bu etkiyi hafifletmek için nasıl kullanılabileceği gibi cerrahi onkoloji alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Tümör hücre kültürü kurulumu prosedürünü, araştırma teknisyeni Christiano 10 dusa ve Dr. Rebecca s laboratuvarı gerçekleştirecektir. Modifiye edilmemiş 41 tümör hücrelerini, tamamlayıcı DMEM içerisinde 10 santimetrelik doku kültürü plaklarına yerleştirerek ve bir doku kültürü inkübatöründe 37 °C ve %5 CO2 koşullarında inkübe ederek başlayın.Hücrelerin konfluensinin %80'i aşmaması için kültürleri gerektiğinde haftada iki ila üç kez bölün. Hücre kültürü kurulumundan bir ay sonra, doku kültürü plağındaki kültür ortamını aspire ederek tümör hücrelerini hasat etmeye başlayın. İçerisinde 2 mL EDTA bulunan 10 mL 1X steril PBS ekleyin ve plağı 37 °C, %5 CO2 ortamında beş ila yedi dakika inkübe edin.Ardından PBS çözeltisi plakadan uzaklaştırıldıktan sonra, plağı iki ila üç kez PBS ile durulayın ve hücreleri 50 mililitrelik konik bir tüpe aktarın. Sonrasında hücreleri bir masaüstü santrifüjde 500 Gs ve dört derece Celsius'ta beş dakika boyunca santrifüjleyin. Süpernatanları aspire ettikten sonra hücre peletini serumsuz DMEM içerisinde yeniden süspande edin.Ardından, hücre konsantrasyonunu belirlemek için bir hücre sayacı kullanın ve hücreleri serumsuz besiyeri ile 500 µL başına 1 × 10⁶ hücre olacak şekilde dilüe ederek cerrahi işlemden bir saat önce buz üzerine yerleştirin. Ağrı yönetimi için fareye cilt altına 0,05 mg/kg buprenorphine enjekte edin. Fareyi %2,5 ISO fluorine ile anestezi ettikten sonra, yeterli anestezi düzeyini sağlamak için ayak tabanını sıkıştırın.Ardından, 30 gauge yarım inçlik ultra ince bir şırıngaya tam olarak 50 µL tümör hücresi süspansiyonu çekin. Hava kabarcıklarını gidermek için şırınganın yan tarafına hafifçe vurun. ISO florin anestezisini sürdürerek, fareyi cerrahi masaya ventral tarafı yukarı gelecek şekilde yerleştirin.Şimdi iğneyi yatay olarak ve doğrudan dördüncü bellek yağ yastığına yerleştirin ve şırınga hacmini yavaşça boşaltın. Enjeksiyonun tamamlanması yaklaşık bir dakika sürmelidir. Enjeksiyon sonrası herhangi bir sızıntıyı temizlemek için pamuklu bir çubuk kullanın.Fareyi kafesine geri döndürmeden önce anesteziden ayılmasına izin verin. Tümör hücresi enjeksiyonundan 13 gün sonra, iki gün boyunca her sekiz saatte bir deri altına 0.05 milligrams per kilogram buprenorphine uygulayarak ağrı yönetimine devam edin. Primer tümörün boyutunu ölçmek için harici bir kumpas kullanın.Bir kumpas yardımıyla en büyük boyuna çap (uzunluk) ve en büyük enine çap (genişlik) ölçün. Tümör hacmini hesaplamak için, uzunluğun genişliğin karesiyle çarpımının yarısı şeklinde olan modifiye elipsoid formülü kullanılır. Bu aşamada, primer tümörün yaklaşık bir santimetreküp olduğu varsayıldığında, bu vakada 1x steril PBS içinde onkolitik virüs olan tercih edilen perioperatif tedavi reaktifi hazırlanmıştır.27 gauge yarım inçlik bir insülin şırıngasına tam olarak 100 µL onkolitik virüs tedavisi çekin. Şırıngadaki tüm hava kabarcıklarını giderin. Ardından, kuyruğu erişilebilir kalacak şekilde bir fareyi sabitleyiciye yerleştirin.Ilık musluk suyu kullanarak kuyruğu nazikçe ısıtın. Lateral kuyruk venlerini görüntülemek için, bir lateral kuyruk veni seçin ve onkolitik virüsü bu vene enjekte edin. İğne lateral vene uygun şekilde yerleştirildiyse, şırınga bastırıldığında herhangi bir direnç hissedilmemelidir.İşlem tamamlandığında, Postum hücre enjeksiyonundan 14 gün sonra fareyi gece boyunca kafesine geri koyun. Ağrı yönetimi için cerrahiden bir saat önce fareye kilogram başına 0.05 miligram buprenorfine şeklinde subkütan uygulama yapın; anesteziyi %2.5 ISO fluorine kullanarak indükleyin ve sürdürün. Bir ila iki santimetrelik bir cilt insizyonu yaptıktan sonra, tüm primer four T one tümörünü meme yağ yastığından nazikçe çıkarın; tümör ve bağlı tüm kalıntılar tek parça halinde çıkmalıdır.Tümörü, daha sonraki immünohistokimya analizi için Formin içinde saklayın. Tümörün eksize edilmesinin ardından, insizyonu iki ila üç adet dokuz milimetrelik zımba ile kapatın. Bir sonraki adım, farelerin bir alt grubuna majör bir cerrahi işlem uygulamaktır.Deri ve deri altı tabakası boyunca ventral orta hat insizyonu ile başlayın. Ardından, peritona erişmek için lineer dirsek bölgesinde üç ila dört santimetrelik bir insizyon yapın. Şimdi, abdomenin sol iç tarafını açığa çıkarmak için üzerindeki bağırsakları bir kenara çekin.Bağırsakları salinle ıslatılmış steril bir gazlı bez ile nemli tutun. Ardından, küt uçlu bir cerrahi pens kullanarak sol böbreği nazikçe kavrayın. Daha sonra, sol böbreğin hilumunu bağlamak için döngü şeklinde bağlanmış 3.0 mum kaplı örgü ipek sütür kullanın.Süturu üç cerrahi düğümle sabitleyin. Şimdi sol böbreği cerrahi makasla çıkarın. Yeterli hemostazın sağlandığından emin olmak için sütur bağını dikkatle kontrol edin.Ardından, deri altı tabakasını 5-0 örgü emilebilir sütürler kullanarak sürekli döngü dikişi ile kapatın. Daha sonra cilt tabakasını 9 mm'lik zımbalar kullanarak zımbalayın. Nefrektomi işlemi hayvan başına 10 dakika sürmelidir.Hayvan kendine geldiğinde, onu kafesine geri yerleştirin ve her sekiz saatte bir kilogram başına 0.05 miligram subkütan buprenorfine uygulayarak iki gün boyunca ağrı yönetimine devam edin; dört T one tümör enjeksiyonundan 28 gün sonra fareyi ötenazi edin ve üzerine %70 etanol püskürtün. Göğüs kafesinin hemen altına makasla ilk kesiyi yaparak akciğer çıkarma işlemine başlayın. Toraksı açığa çıkarmak için göğüs boşluğunun ventral orta hattı boyunca deri ve subkütan tabakayı kesin.Ardından, her iki yanda deri ve doku boyunca boyuna kadar lateral insizyonlar yapın. Şimdi, akciğerler serbest kalana kadar bağ dokusunu keserek akciğerleri nazikçe kavrayın. Sol ve sağ lobları bir arada tutan bifurkasyonun üzerinden trakeayı kesin.Ardından, kalıntı kanı temizlemek için çıkarılan akciğerleri soğuk PBS'ye daldırın ve %10 Tamponlu formaline yerleştirin; akciğerleri tümör metastazı değerlendirmesi için fotoğraflayarak ve tümör yükü nicelendirmesi için tartarak işlemi tamamlayın. Dört T bir tümör rezeksiyonundan 14 gün sonra, akciğerler toplandı ve metastazlar açısından incelendi; burada abdominal nefrektomi yapılmamış bir fareye ait akciğer gösterilmektedir. Bazı metastaz yapmış tümörler görünür durumdadır.Buna karşılık, tümör rezeksiyonunun hemen ardından uygulanan cerrahi nefrektomi, pulmoner metastaz sayısında belirgin bir artışla sonuçlanmıştır. Bu fotoğraf, tümör rezeksiyonu ve nefrektomi sonrası onkolitik virüs ile tedavi edilen bir fareye ait akciğerleri göstermektedir; burada gösterilen diğer akciğerler ise tümör rezeksiyonu ve nefrektomi sonrası influenza aşısı ile tedavi edilen bir fareye aittir. Bu kategorilerin her birindeki akciğer tümör nodüllerinin sayılması, nefrektomi cerrahisi uygulanan farelerde, cerrahi uygulanmayan veya preoperatif terapötik müdahale yapılan farelere kıyasla pulmoner metastaz sayısında net bir artış olduğunu göstermektedir. Nefrektomi cerrahisi uygulanan ancak preoperatif tedavi almayan farelerin akciğerleri, diğer test kategorilerine göre anlamlı derecede daha ağırdır.Böylece, replike olan onkolitik virüs ve inaktive influenza aşısının ameliyat öncesi uygulanması, tümör rezeksiyonunu takip eden majör cerrahinin prometastatik etkilerini önemli ölçüde hafifletmiştir. Bu grafikler, NK hücre sayıları normal veya sağlam olan farelerdeki ve NK hücreleri anasi ALO GM one kullanılarak farmakolojik olarak azaltılmış farelerdeki akciğer tümörü sayılarını göstermektedir. NK hücreleri azaltılmış farelerde, perioperatif onkolitik virüs veya influenza aşısı immünoterapilerinin terapötik etkisi azalmıştır.Bu durum, NK hücrelerinin aşı tedavisi sonrası metastazların önlenmesinde aracı bir rol oynadığını göstermektedir. NK hücre fonksiyonunu daha ayrıntılı karakterize etmek için, cerrahi stres uygulanmış ve tedavi edilmemiş kontrol gruplarından saflaştırılan DX five pozitif hücrelerin yak one hedef hücreleri ile kültüre edildiği ex vivo NK hücre öldürme kapasitesi değerlendirilmiştir. Siyah düz çizgi, tedavi edilmemiş farelerin NK hücre öldürme yeteneğini; siyah noktalı çizgi ise cerrahi stres uygulanmış farelerin NK hücre öldürme yeteneğini göstermektedir.Siyah düz çizgiden siyah noktalı çizgiye doğru olan aşağı yönlü kayma ile gösterilen sitotoksisite yüzdesindeki azalma, cerrahi sonrası farelerde NK hücre sitotoksik fonksiyonunda bir bozukluk olduğunu kanıtlamaktadır. Gri düz çizgiler, cerrahi işlem görmemiş ancak onkolitik virüs veya influenza aşısı şeklinde immünoterapi almış farelerden elde edilen NK hücresi öldürme kapasitesini göstermektedir. Gri noktalı çizgiler ise hem perioperatif immünoterapi hem de cerrahi işlem uygulanmış farelerin NK hücresi öldürme yeteneğini belirtmektedir.Gri düz çizgiden gri noktalı çizgiye doğru gerçekleşen aşağı yönlü kayma ile gösterilen yüzde sitotoksisitedeki azalma, perioperatif immünoterapi almalarına rağmen cerrahi sonrası farelerde NK hücre sitotoksik fonksiyonunda bir defekt olduğunu kanıtlamaktadır. En önemlisi, gri noktalı çizgiler hala siyah noktalı çizgilerden çok daha yüksektir. Bu durum, cerrahiyle tetiklenen NK hücre sitotoksik disfonksiyonunun perioperatif immünoterapi ile düzeltilmesinin mümkün olabileceğini göstermektedir.Bu videoyu izledikten sonra, primer tümörler oluşturarak spontan metastazların ve cerrahi stresin hayvan modelinin nasıl oluşturulacağı konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız. Primer tümörlerin rezeke edilmesi, nefrektomi ile ek cerrahi stresin indüklenmesi ve çalışma sonunda akciğer metastatik tümör nodüllerinin değerlendirilmesi süreçlerini öğrenmiş olacaksınız. Ek olarak, bu modelin cerrahinin doğuştan gelen bağışıklık sistemi üzerindeki baskılayıcı etkilerini ve immünoterapilerin bu etkiyi tersine çevirme kapasitesini incelemek için nasıl kullanılabileceğini anlamalısınız.

a-mouse-tumor-model-surgical-stress-to-explore-mechanisms

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Immünkompetan Fare Seröz Yumurtalık Kanseri bir Ortotopik Model In vivo</emTümör Bağışıklık Yanıtları> Tümör Görüntüleme ve İzleme

Bu video, tam olarak rezeke edilmemiş deri altı tümörleri olan bir fare modelinde adjuvan veya ek tedavinin test edilmesini göstermektedir. Kısmen tümör rezeke edilen fare, T düzenleyici hücrelerin anti-sitotoksik proteinini hedef alan, potansiyel olarak tümör büyümesini azaltan ve etkili adjuvan tedavi öneren bir antikor ile tedavi edilir.

Tam Rezeke Edilmemiş Subkutan Tümörü Olan Bir Fare Modelinde Adjuvan Tedavi

Ortotopik meme kanseri primer tümör modeli ve primer tümörün cerrahi olarak çıkarılması açıklanan spontan metastaz oluşturmak için fare ömrünü uzatmak için. tümör büyümesi ve ilerlemesi izlenir ve lusiferaz floresan görüntüleme ile ölçülür.

Spontan Meme Kanseri metastaz Ortotopik Fare Modeli

over kanseri periton yayılması çok adımlı süreci açıklamak için, mevcut çalışma bu tümör hücreleri ile ortotopik aşılamadan yoluyla orijinal tümör gelişimi ve periton metastazı bir fare deneysel modeli sunar.

Orijinal Tümör Geliştirme Murin Deneysel Modeli ve Periton Metastaz<em&gt; yoluyla</emYumurtalık Kanseri Hücreleri ile&gt; Ortotopik aşılama

Bu protokol mekanizmaları ameliyat sonrası neuroinflammation ve davranış değişiklikleri ve doku rejenerasyonu yaşlanma sırasında çalışmaya parabiosis, birlikte çalışma için kullanılan ortopedik cerrahi bir fare modeli açıklar.

Ameliyat sonrası bilişsel işlev bozukluğu ve doku rejenerasyonu çalışmaya ortopedik cerrahi bir fare modeli

Bu protokolde, yumuşak doku sarkomunun (neo) adjuvan tedavileri test etmek için tamamlanmamış cerrahi rezeksiyonunun fare modelini tanımladık.

Test (Neo) adjuvan Tedaviler için İntam Rezeke Yumuşak Doku Sarkomu Bir Fare Modeli

Burada, bir fare tümörü modelinde tümöre özgü ve periferi kaynaklı tümör kaynaklı lenfositlerin karakterizasyonu için bir tümör transplantasyon protokolü sunulmaktadır. Alıcı kaynaklı immün hücrelerin akışının akım sitometrisi ile spesifik olarak izlenmesi, antitümör immün yanıtlar sırasında bu hücrelerin fenotipik ve fonksiyonel değişikliklerinin dinamiklerini ortaya koymaktadır.

Farelerde Tümör Sızan CD8 + T Hücrelerinin Dinamiğini Değerlendirmek için Tümör Transplantasyonu

Bu makalenin amacı, KitV558Δ/+ fare modelini ve fare örneklerinin başarılı diseksiyonu ve işlenmesi için teknikleri tanımlamaktır.

Gastrointestinal Stromal Tümörün Genetiği Değiştirilmiş Bir Fare Modelinde Moleküler ve İmmünolojik Teknikler

Ağız boşluğunda kurulan ağız skuamöz hücreli karsinom tümörlerinin cerrahi olarak rezeksiyon edilmesinin benzersiz bir yöntemi burada gösterilmiştir.

Oral Skuamöz Hücreli Karsinomun Farenin Preklinik Modelleri İçin Translasyonel Olarak İlgili Tümör Rezeksiyon Modeli

Burada, beyin tümörlerinin cerrahi örnekleri, olarak adlandırılan "tümör eksplant yöntemi" ile ilaç etkinliğini test etmek için bir yöntem kurmuştur. Bu yöntemde, katı tümörlerin mikroçevresinin bozmadan ilaç etkinliğini değerlendirmek. Bu yöntemin güvenilirliğini doğrulamak için, ilk basamak kemoterapötik ajan, temozolomide tedavi glioma örnek temsili verileri açıklanmaktadır.

Cerrahi Örneklerinin tümör eksplantlarındaki Roman Anti-Kanser İlaç Geliştirme Yöntemi

Keşfedin ameliyat sonrası immünosüpresyon mekanizmalarını ve perioperatif immünoterapilerin etkinliğini fare tümör modeli kullanarak. Bu yöntem cerrahi stresin metastaz üzerindeki etkisini azaltmada immünoterapi potansiyelini gösterir.

Ameliyat sonrası Immunosupressjonun ve Mekanizmaları keşfedin ve Roman Perioperatif İmmünoterapiler Değerlendirmesinde Cerrahi Stres Fare Tümör Modeli (Video) | JoVE Journal

Ameliyat sonrası Immunosupressjon'un ve Mekanizmaları keşfedin ve Roman Perioperatif İmmünoterapiler Değerlendirmesinde Cerrahi Stres Fare Tümör Modeli

Daha fazla video keşfet