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Screening siRNA para identificar ubiquitina y reguladores del sistema ubiquitina-como de las vías biológicas en células de mamífero en cultivo
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JoVE 신문 생물학
siRNA Screening to Identify Ubiquitin and Ubiquitin-like System Regulators of Biological Pathways in Cultured Mammalian Cells
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Screening siRNA para identificar ubiquitina y reguladores del sistema ubiquitina-como de las vías biológicas en células de mamífero en cultivo

DOI:
10.3791/51572-v

•

10:43 min

•

May 24, 2014

•

, , , ,
1MRC Protein Phosphorylation and Ubiquitylation Unit, College of Life Sciences,University of Dundee, 2Centre for Gene Regulation and Expression, College of Life Sciences,University of Dundee

Chapters

  • 00:05Title
  • 01:22Characterizing Hypoxia-responsiveness to Develop the Assay
  • 04:18Primary Screen: First Day
  • 07:27Primary Screen: Subsequent Days
  • 08:27Sample Screen
  • 10:09Conclusion

Summary

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Aquí se describe una metodología para llevar a cabo un siRNA dirigidos pantalla "ubiquitome" para identificar nuevos ubiquitina y reguladores-ubiquitina de la respuesta celular mediada HIF1A a la hipoxia. Esto puede ser adaptado a cualquier vía biológica, donde una lectura robusta de la actividad del indicador está disponible.

Tags

SiRNA ScreeningUbiquitinUbiquitin-like SystemBiological PathwaysMammalian CellsPost-translational ModificationUbiquitomeHIF1AHypoxia ResponseTranscription-based Luciferase ReporterAssay DevelopmentPrimary ScreeningSecondary ScreeningTertiary/deconvolution ScreeningTargeted SiRNA LibraryOff-target Effects

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