Le iniezioni per via endovenosa nel topo neonatale

L'obiettivo generale di questa procedura è quello di somministrare per via endovenosa un articolo di prova a un topo neonato. Ciò si ottiene identificando prima i topi di uno o due giorni da trattare. Il secondo passo è preparare i materiali di iniezione.

Successivamente, viene eseguita l'iniezione. Il passo finale è quello di restituire i topi trattati e svegli alla madre. In definitiva, è necessario un test a valle per determinare se l'articolo di prova ha l'effetto desiderato.

In generale, le persone che non conoscono questo metodo hanno maggiori difficoltà a identificare e mirare alla vena appropriata. Per iniziare, raccogli tutta l'attrezzatura necessaria per la procedura di iniezione. Inoltre, preparare il colorante blu Evans all'1% in PBS e una siringa da insulina con un ago da 30 gauge per animale da iniettare.

Quindi, rimuovi la madre in una gabbia separata mentre manipoli i cuccioli. Quando è pronto. Metti un singolo cucciolo direttamente sul ghiaccio bagnato per 30-60 secondi.

Anestetizzare. Non lasciare l'animale sul ghiaccio troppo a lungo a causa del rischio di complicazioni legate all'ipotermia mentre l'animale è sul ghiaccio. Siringa Lotus con 30 microlitri di colorante blu di Evan.

Quando l'animale è completamente anestetizzato, confermato dalla mancanza di movimento sul ghiaccio mentre respira ancora, spostalo al microscopio per un'iniezione con la mano destra, posiziona il muso dell'animale nel posto giusto. L'indice sinistro sul muso e il medio sinistro si sono avvicinati all'auricolare in modo che l'auricolare si trovi tra l'indice e il medio. Esamina appena anteriormente all'auricolare per un capillare superficiale che si muove quando la pelle viene manipolata.

Questo capillare non è l'obiettivo. Tuttavia, l'identificazione è importante per l'identificazione della vena temporale. Successivamente, individuare una vena scura e ombreggiata inferiore al capillare che rimane fissa indipendentemente dalla posizione della pelle.

La vena temporale appare ombrosa, corre da dorsale a ventrale e alimenta la vena giugulare. Entrare nella vena temporale con l'ago smussato verso l'alto. Se inserito correttamente.

È possibile visualizzare il riempimento dello smusso dell'ago con sangue attraverso la pelle. Quindi premere lentamente lo stantuffo e notare lo sbiancamento della vena lungo il lato del viso. Lasciare che l'ago rimanga all'interno della vena per altri 10-15 secondi per evitare il riflusso dell'iniezione.

Dopo un'iniezione adeguata, il cucciolo dovrebbe diventare blu. Quasi immediatamente. Rimuovere l'ago e applicare con una forza delicata un batuffolo di cotone sul sito di iniezione fino a quando il sangue non si coagula.

Lascia che il cucciolo si riprenda e si riscaldi due o tre minuti. Conferma che il cucciolo sia cosciente, eretto e in movimento. Prima di tornare nella gabbia, i cuccioli possono essere messi a coppa nelle mani guantate dell'investigatore per fornire un calore adeguato per favorire il recupero.

In alternativa, posiziona un termoforo sotto la gabbia di casa per facilitare il riscaldamento del cucciolo iniettato. Rimetti il cucciolo nella gabbia di casa e coprilo con la lettiera. Per garantire l'accettazione da parte della madre, utilizzare una nuova siringa e un batuffolo di cotone per ogni cucciolo per mantenere la sterilità dopo l'iniezione endovenosa nel neonato di un transgene GFP A V nove Inod L'espressione è osservata in tutto il cervello, compreso lo striato anteriore, così come il ponte e il cervelletto.

L'espressione di GFP è rilevata anche nel midollo spinale e si osserva sia nei motoneuroni spinali che nei neuroni dei gangli della radice dorsale. L'immunofluorescenza della GFP è rilevabile nel topo adulto, nel cuore e nel fegato dopo l'iniezione endovenosa neonatale di GFP autocomplementare A, A, V. nove. In confronto, l'espressione di GFP è assente nel cuore e nel fegato dei topi non iniettati una volta padroneggiati.

Questa tecnica dovrebbe richiedere dai tre ai cinque minuti per animale. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come eseguire iniezioni endovenose nei topi neonati.