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Radiomarcatura e quantificazione dei livelli cellulari di fosfoinositidi da alte prestazioni cromatografia liquida accoppiata flusso scintillazione
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JoVE 신문 화학
Radiolabeling and Quantification of Cellular Levels of Phosphoinositides by High Performance Liquid Chromatography-coupled Flow Scintillation
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Radiomarcatura e quantificazione dei livelli cellulari di fosfoinositidi da alte prestazioni cromatografia liquida accoppiata flusso scintillazione

DOI:
10.3791/53529-v

•

10:52 min

•

January 06, 2016

•

, ,
1Department of Chemistry and Biology, Program in Molecular Science,Ryerson University

Chapters

  • 00:05Title
  • 00:58Yeast Cell Culture and Radiolabeling of Phosphoinositides
  • 02:58Deacylation and Extraction of the Radiolabeled Phosphoinositides
  • 05:14Separation of Tritium-labeled Glycero-inositides by High Pressure Liquid Chromatography (HPLC)
  • 07:15Data Analysis
  • 08:55Results: HPLC Analysis of Radiolabeled Phosphoinositides
  • 09:55Conclusion

Summary

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Fosfoinositidi stanno segnalando lipidi la cui abbondanza relativa cambia rapidamente in risposta a vari stimoli. Questo articolo descrive un metodo per misurare l'abbondanza di fosfoinositidi dalle cellule metabolicamente marcatura con 3 H- myo-inositolo, seguita da estrazione e deacilazione. Estratti glycero-inositides sono quindi separati mediante cromatografia liquida ad alta prestazione e quantificati dal flusso scintillazione.

Tags

Keywords: RadiolabelingPhosphoinositidesHPLCFlow ScintillationYeastMammalian CellsInositolPerchloric AcidEDTACentrifugationSonicationLiquid CultureCell GrowthCell Lysis

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