JoVE 비디오를 활용하시려면 도서관을 통한 기관 구독이 필요합니다. 전체 비디오를 보시려면 로그인하거나 무료 트라이얼을 시작하세요.
Chapters
- 00:05Title
- 00:43Synthesis of NNS Sub-libraries for Each Amino Acid Position by Two-step PCR Site-directed Mutagenesis
- 01:53Cloning of NNS Sub-libraries into Selection Vectors
- 03:47Selection of the TEM-1 Whole-Protein Saturation Mutagenesis Library for Antibiotic Resistance
- 05:51High Throughput Sequencing to Determine Fitness Effects of Mutations
- 08:44Results: High Throughput Sequencing from Whole-Protein Saturation Mutagenesis
- 10:16Conclusion
نقدم بروتوكول للتقييم الوظيفي للمكتبات موقع واحد التشبع الطفرات شاملة من البروتينات باستخدام الإنتاجية العالية التسلسل. الأهم من ذلك، يستخدم هذا النهج أزواج التمهيدي متعامدة مع تعدد بناء مكتبة والتسلسل. وتقدم ممثل النتائج باستخدام تيم-1 β-اكتاماز المختارة في جرعة ذات الصلة سريريا من الأمبيسلين.
