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Chapters
- 00:05Title
- 00:43Synthesis of NNS Sub-libraries for Each Amino Acid Position by Two-step PCR Site-directed Mutagenesis
- 01:53Cloning of NNS Sub-libraries into Selection Vectors
- 03:47Selection of the TEM-1 Whole-Protein Saturation Mutagenesis Library for Antibiotic Resistance
- 05:51High Throughput Sequencing to Determine Fitness Effects of Mutations
- 08:44Results: High Throughput Sequencing from Whole-Protein Saturation Mutagenesis
- 10:16Conclusion
Nós apresentamos um protocolo para a avaliação funcional de bibliotecas de um único site saturação mutagênese abrangentes de proteínas utilizando sequenciamento de alto rendimento. É importante ressaltar que essa abordagem usa pares de primers ortogonais multiplex construção da biblioteca e sequenciamento. Os resultados representativos utilizando TEM-1 β-lactamase seleccionado a uma dosagem clinicamente relevante de ampicilina são fornecidos.
