Name: 표면 패드 심전도를 사용하여 마우스의 심근 허혈 및 재관류 손상의 확인 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-11-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 23 s
Description: 학습하세요 마우스 심근 허혈 및 재관류 손상 확인을 위한 표면 패드 심전도 기법. 실시간 ECG 모니터링으로 수술 정확성과 재현성을 향상시키고, 수술 후 분석 없이 즉각적인 허혈 및 재관류 확인이 가능합니다.

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이 연구는 미국 국립보건원(R15HL129140) 재향군인회 연구개발국(Veterans Affairs Office of Research and Development)의 생물의학 실험실 연구 개발 서비스(Biomedical Laboratory Research and Development Service)의 Merit Review 상(BX002332 및 BX000640상)과 Institutional Research and Improvement 계정의 기금으로 지원되었습니다. 이 프로젝트는 미국 국립보건원(National Institutes of Health)의 보조금 C06RR0306551 부분적으로 지원됩니다.

동물에서 수행 모든 수술 절차는 관리 및 사용 실험 동물 (13) 또는 기타 적절한 윤리 지침에 대한 가이드에 따라 수행되어야한다. 프로토콜은 진행하기 전에 해당 기관에서 동물 복지위원회의 승인을 받아야한다. 1. ECG 준비 참고 : 시작하기 전에, 장갑, 안경 깨끗한 실험실 코트 또는 일회용 가운을 포함한 개인 보호 장비를 돈. <ol><li> 비 알코올 및 비 표백 계 염액을 이용하여 ECG 패드를 청소한다. 조심스럽게 전극 패드가 손상되지 않도록 초과 솔루션을 지워하는 닦아 섬세한 작업을 사용합니다. </li><li> 심전도 패드가 가열 기능이 있으면, 그것을 사용할 수 있습니다. 마취 된 쥐 빠르게 체온을 상실하는 경향이있다. 수술 14에 걸쳐 37 ℃의 정상 체온 체온을 유지하기 위해 40 ~ 42 ℃로 패드를 가열한다. 몸의 성질을 모니터링직장 온도계를 사용하여 ature. 체온 ~ 37 ° C를 유지하기 위해 필요에 따라 패드의 온도를 조정한다. </li><li> 대부분의 thoracotomies이 마우스는 다시 (부정사)에 누워 수행되는, 토글은 &quot;부정사&quot;설정으로 반전되어 있는지 확인합니다. 많은 ECG 패드는 경향이와 부정사 위치 사이를 전환하는 기능을 가지고있다. 오른쪽 방향을 선택하지 않으면 심전도 이벤트의 허위 진술이 발생할 수 있습니다. </li><li> 5 % 흡입 이소 플루 란 1 L / 분의 산소를 사용하여 마우스를 마취. 마우스가 마취되면, ECG 패드에 전송 마우스는 마취 코 콘을 갖춘 2 % 및 1 L / 분 산소 이소 플루 란을 줄일 수 있습니다. 마우스의 발을 집게로 끼 때 반응하지 않는 마우스를 보장함으로써 적절한 마취를 확인합니다. </li><li> 마취 동안 건조 및 각막 손상을 방지하기 위해 마우스의 눈을 통해 눈의 윤활 연고의 얇은 코트를 적용합니다. </li><li> 보이는 모든 침구를 제거하는 닦아 젖은로 마우스의 발을 청소즉 발에 붙어있을 수 있습니다 또는 ECG 패드로 발에서 전기 자극의 전달을 방해 할 수 있습니다. 와이프와 드라이 발. </li><li> 심전도 패드에있는 4 개의 금속 전극들 각각에 높은 전도성 전해질을 겔 (a USD 다임보다 약간 작음) 소량을 적용한다. 참고 : 젤의 작은 금액을 적용해야하는 것은 너무 많은 젤 어려운 테이프를 사용하여 패드에 발을 억제 할 수있다. 또한, 발은 테이프를 적용하기 전에 젖은한다면 수술 중 구속에서 미끄러 가능성이 높다. </li><li> 부정사 위치에 마우스로, 해당 전극 (그림 1)에 각각의 발을 억제하는 명확한 의료 테이프를 사용합니다. 첫째을 눌러 각 테이프의 조각을 발하고는 ECG 패드에 테이프를 준수합니다. 각 구속 발 전해질 젤과 전극과의 접촉에 있는지 확인합니다. </li></ol> 2. ECG 취득 <ol><li> ECG 획득, conf의 사용 장비에 따라심전도 파형을 실시간으로 시각화 될 수 있도록 시스템을 igure. 심장 초음파 시스템에서 생리적 모니터링 설정을 이용하여 ECG 녹화를 들어, 라이브 B 모드 영상은 화면의 하단 실행 ECG 파형을 가질 것이다. 참고 : 가장 그 장비를 구성하는 방법을 결정하기 위해 개별 컴퓨터 사용자 가이드를 참조하십시오. </li><li> 심 초음파 기계에 B 모드 키 또는 다른 심전도 기록 장치에 해당하는 키를 눌러 ECG 파형의 실시간 시각화를 사용합니다. <ol><li> 진폭의 차이를 설명하기 위해 해상도를 조정합니다. 질문 파의 R 파 또는 트로프 (밸리)의 피크가 시각적 프레임 밖에있는 경우, 파형의 전체 높이를 관찰 할 수있을 때까지의 해상도를 조정한다. 참고 :이는 심 초음파 기계에 생리 설정 탭에서 수행 할 수 있습니다. 증가를 클릭하거나 전체 파형이 표시 될 때까지 화살표를 줄입니다. </li></ol></li><li> 이미지는 OBT 될 때마다ained, 도구의 ECG 패드를 취소합니다. 포셉 또는 손가락으로 ECG 기록하는 동안 마우스를 터치하면 파형을 방해합니다. 마우스가 어떤 심전도를 기록하기 전에 ECG 패드에 여전히 및 손길이 닿지 않은 있는지 확인하십시오. </li><li> 마우스에 어떤 수술 절개하기 전에 컴퓨터의 &quot;레코드&quot;또는 &quot;저장&quot;기능을 사용합니다. 이 이미지는 나중에 비교 기준으로 사용됩니다. </li></ol> 3. 수술 절차 및 녹화 ECG <ol><li> 시작하기 전에 (부 프레 노르 핀 1.5 μg의, 복강 내)을 진통제와 마취 마우스를 주입한다. 허혈 / 재관류 수술 절차의 세부 사항은도 5의 다른 찾을 수있다. </li><li> 화학적으로 또는 기계적으로 수술 부위 주위의 머리를 제거하고 betadine 용액 영역 소독. 식도와 기관지에 수직 절개 평행을 만들기 위해 메스를 사용합니다. 부드럽게 기관을 덮는 얇은 조직 때까지 절개 양쪽에 림프절로 이동드러난. 기관의 흰색 연골 고리가 표시 될 때까지 집게를 사용하여 부드럽게 조직을 분리합니다. 참고 : 우리는 일반적으로 나이 르 머리 제거 로션을 사용합니다. 로션은 1 분 ~ 수술 부위에 적용된다. 나이 르는 철저하게 식염수 또는 물을 사용하여 씻어된다. 높은 해상도 심장 초음파 검사는 (모낭을 감지 할 수있는) 전과 수술 후 수행하기 때문에이 방법은 우리의 실험실에서 바람직하다. 그러나,주의 등 성기 민감한 영역을 피하기 위해주의해야하고 충분히 전위 피부 화상을 피하기 위해 떨어져 나이 르 세척. </li><li> 신속 코 콘에서 마우스의 코를 제거하고 마우스의 입으로와 목을 향해 환기 튜브를 삽입합니다. 통기 튜브의 선단이 노출 된 넥 영역을 통해 볼 때, 기관의 시동과 함께 튜브를 정렬. 부드럽게 t 시각적으로 확인할 수있는 기관에 튜브 슬라이드까지 상승 압력을가하면서쪽으로 튜브 측을 흔들반투명 기관 hrough. </li><li> 마우스가 삽관 과정에서 마취 남아 있는지 확인합니다. 삽관에서 일시 중지하고 약동하기 시작하면 코 콘에 마우스를 반환합니다. </li><li> 문자열의 루프를 사용하여 루프를 통해 마우스의 두 앞니 후크와 문자열이 마우스의 머리를 안정하고 수술 중 움직이지 않는 환기 튜브를 보장하기 위해 ECG 패드에 종료 테이프. 신속 설치류 인공 호흡기에 환기 튜브를 연결하고 마우스의 무게에 따라 환기 설정을 조정합니다. 장소에 테이프 환기 튜브. </li><li> 건조에서 조직을 유지하기 위해 따뜻한 식염수에 적신 거즈와 마우스의 노출 된 기관을 커버. </li><li> 흉골의 왼쪽에 메스를 사용하여 수직 절개를합니다. </li><li> 집게를 사용하여 부드럽게 근육 근막 층으로부터 층을 분리한다. 조심스럽게 보이는 혈관을 절단하지 않고 기본 근육층을 자른다. </li><li> 집게를 사용하면, 세 번째 늑골을 잡아 당겨위쪽으로 부드럽게. 한 손으로 갈비뼈에 그립을 유지하고 조심스럽게 세 번째와 네 번째 늑골 사이 늑간 조직을 절단하는 수술 가위를 사용합니다. 폐는 손상되지 않았는지 확인합니다. 주 : 폐 의한 압력 구배의 손실에 곧바로 흉강은 수술로 절개 한 후에 천공 깊이 흉강으로 후퇴한다. 폐 계속하기 전에 후퇴 할 때까지 기다립니다. </li><li> 잡아 부드럽게 마음을 둘러싸고있는 심낭의 얇은 층을 분리 집게를 사용합니다. </li><li> 견인기를 삽입하거나 수동으로 심장이 갈비뼈 사이에 볼 수있는 위치로 갈비뼈를 이동 리브 견인기로 집게를 사용합니다. 참고 :이 합자의 배치 중에 오른쪽 발을 중첩되도록 마우스의 왼쪽 발을 이동하는 것이 일반적이다. 이 좌심방, 또는 귓바퀴가, 합자의 배치시 쉽게 볼 수 있도록 마음을 배치하는 데 도움이됩니다. w 유효한 ECG 그주의왼쪽 아래 발은 전극 떨어져있는 동안 aveforms를 얻을 수 없습니다. 이러한 이유로는 봉합의 합자는 심근 조직을 통해하지만 매듭이 강화되기 전에 전달 된 후 그 전극에 발을 반환하는 것이 좋습니다. </li><li> 왼쪽 귓바퀴 아래, 시각적으로 LAD을 찾습니다. 신속 LV 공동 침투로 LAD 아래를 통과하는 깊이 충분하지만 깊은 아니라 심근에 7-0 실크 테이퍼 봉합 바늘을 삽입합니다. 봉합 합자의 자유 (비 바늘) 끝 부분에 남아있는 봉합 실크의 약 4cm가있을 때까지 통해 봉합의 합자를 당깁니다. </li><li> 간단한 봉합 매듭을 묶어 시작합니다. 봉합 실크의 자유 단부는 매듭을 형성하는 루프를 통해 인출 된 후, 일시. </li><li> 집게와 봉합 실크의 자유와 바늘 끝을 모두 잡고 형성하는 매듭 아래 및 심 외막 표면 위에 PE-10 튜브의 ~ 1cm 섹션을 삽입합니다. </li><li> 마우스의 왼쪽 발을 교차하는 경우, 그 프로에 발을 반환전극 당. 체육-10 튜브가 마음에 봉합 될 수 있도록 매듭을 조입니다. ECG 기록 할 수 있도록 마우스로 모든 신체 접촉을 놓습니다. </li><li> ~ 10 초 동안 순환에 ECG 파형을 허용합니다. &quot;폐쇄의 시간&quot;으로 시각적으로 심전도 파형 기록 파형을 확인합니다. T 개의 파장이 1 분 내에 진폭이 증가하지 않는 경우, 끈의 위치를 ​​재평가. <ol><li> T 파의 진폭은 증가 하나 연구에서 동물을 폐기 또는 합자 배치를 해결하려고하지 않습니다. </li></ol></li><li> 육안 LV의 허혈성 말뚝을 둘러 박기을 확인하는 심근의 색상을 선택합니다. </li><li> 체육-10 튜브 주위 ECG 변화와 심근 색 변화가 허혈을 표시하는 경우, 두 번 매듭 봉합. </li><li> 따뜻한 식염수 거즈와 오픈 흉강을 커버. </li><li> 기록 ECG 허혈성 기간의 지속 시간마다 5 ~ 10 분. </li></ol> ECG를 사용하여 재관류 4. 확인 <ol><li> 식염수 거즈 코브를 제거흉강 링과 마음을 시각화. </li><li> 체육-10 튜브 꼭대기 봉합 실크를 잘라 블레이드를 사용합니다. 합자이 절단되면, PE-10 튜브의 부분을 제거하고 부드럽게 심근에서 봉합의 합자를 제거합니다. </li><li> 마우스로 모든 신체 접촉을 풀고 ~주기 10 초 심전도 파형을 할 수 있습니다. 등의 기록 파형 &quot;재관류의 시간.&quot; 원하는 실험 시점에 도달 할 때까지 ECG 파형을 매 50-10 분을 기록하는 것을 계속한다. </li><li> 필요에 따라 진폭의 변화에 ​​대한 해상도를 조정합니다. T 개의 파가 PE-10 튜브 및 합자의 제거시 변경되지 않는 경우, 재관류가 확인되지 않습니다. <ol><li> T 개의 파가 튜브의 제거시 변경, 두 연구에서 동물을 폐기 또는 합자 배치를 해결하려고하지 않습니다. </li></ol></li><li> 시각적으로 추가로 붉은 색에 복귀하여 재관류를 확인하는 심근를 검사합니다. </li><li> 5-0로 늑간 공간을 봉합 닫기 흉강실크 봉합 수술시 입력 한 과잉 공기를 배출하는 마우스의 가슴에 부드러운 압력을가하면서. 그리고 근육 층 그리고 마지막으로, 피부를 봉합. 주 : 흉강에 압력을 적용하면 모든 마우스에서 공기의 흉강을 철수하기에 충분하지 않을 수 있습니다. 따라서, 피난의 주사기와 바늘 방법은 모든 공기가 배출되었는지 확인하기 위해 사용되어야한다. </li><li> 전극에서 마우스의 발을 흡입 마취를 해제하고 제거하기 전에 마지막 ECG를 기록합니다. 2 L / min의 산소를 증가 마우스가 의식을 회복 할 때까지 환기를 유지한다. </li><li> 마우스가 경색 변동을 방지하기 위해 일정한 온도 제어 된 환경, 예를 들면 가열 패드 또는 따뜻한 인큐베이터에 복구 할 수 있습니다. 마우스 얼굴을 찡 그리기 규모로 나타낸 바와 같이 필요에 따라 다음 수술 후 부 프레 노르 핀 24 시간에 마우스를 치료합니다. 참고 : 재관류에 대한 절차도 쑤 등에 의해 자세히 설명합니다 (5). </li></ol>

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심근 허혈 및 재관류를 확인하기위한 추가 방법은 흡장 합자의 정확한 위치를 보장으로 ECG 변화를 사용. 합자 위치의 정확도는 동물들 사이에서 데이터의 변동성을 줄이는 것이 중요합니다. 마우스 마음에 LAD 시각화하기 어려운 동맥이다. 따라서, 심전도 변화를 시각적 창백를 보충하면 합자 및 결과 조직 손상의 정확한 위치를 확인하는 데 도움이됩니다. 심전도 패드 심장의 비 침습적보기를 제공하기 때문에, 다수의 심전도는 연구 기간 동안 얻어 질 수있다. 이 중 및 수술 후 발생하는 심근 변화의 더 나은 이해를 제공 할 수 있습니다. 수술 후의 비교를 위해 사용하는 기준 ECG를 획득하는 것이 중요하다. 나중에 조직 죽음과도 심실 동맥류는 전기 생리 신호와 ECG 구성 변경의 처짐에 의해 관찰 할 수있다. 이 통찰력을 제공 할 수있다심부전의 진행에. 심 초음파 시스템을 이용하여 ECG 측정의 이점은 전 또는 허혈 / 재관류 수술 ...

심장 질환은 사망 전 세계적으로 1, 2의 주요 원인 남아있다. 뿐만 아니라,이 공통 심근 손상 부위 심근 경색 4 전신 3 심장에서 혈액을 펌핑 할 책임이 좌심실 (LV) 가장 근육 챔버이다. 좌심실 조직 죽음은 종종 수축기 심부전 발생합니다. 심장 질환의 동물 모델은 의치 심혈관 연구의 발전을위한 필수적이다. 마우스의 C57BL / 6 변형으로 인해 자신의 빠른 번식 시간, 저렴한 비용으로 동물 모델에 대한 인기가 선택되어 유전자 변형 완화했다. 심장 질환에 대한 연구를위한 대부분 외과 뮤린 모델은 왼쪽 관상 동맥 LAD 분기의 폐색을 포함한다. 젊은이는 왼쪽 둔각 한계 5,6라고도합니다. 젊은이는 좌심실 전방 및 안테 - 측면 벽에 혈액을 공급한다. LAD 폐색 연구는 때때로, 전방 경색을 유도 INT 확장을 목표로하고 있습니다하부 및 측면 벽 영역 (7) 오. 심근 경색의 연구에 자주 사용되는 두 모델은 만성 폐색 심근 경색과 심근 허혈 / 재관류 손상을 포함한다. 만성 폐색은 수술 주위 봉합 영구적으로 LAD 통해 혈액의 흐름을 차단하여 작성됩니다. 허혈 / 재관류 손상은 단지 일시적으로 일반적으로 30 ~ 60 분, 허혈성 기간을 같은 방법으로 많이 생성된다. 일과성 허혈을 달성하기 위해, 재관류 기간 뒤에 심장의 외막 표면에 LAD에 평행하게 배치되는 LAD 주위 흡장 봉합 관계 작은 PE-10 튜브, 호스 및 흡장 봉합사를 제거하고, 혈액이고 다시 동맥 통해 심근 내로 유동시켰다. 허혈 / 재관류 수술 인해 PROM 포함 인간 경색의 치료 평행 재관류 손상의 특성으로 임상 적으로 관련된 것으로 간주 한PT 관상 혈관 성형술 및 스텐트 삽입술 동맥, 관상 동맥 우회술. 일반적으로 이러한 수술하는 동안 마우스 마음에 LV의 허혈은 심근 벽의 볼 창백에 의해 확인된다. 그러나, 단순히 일정한 모니터링 조건으로 심전도 (ECG) 패드에서 수술을 수행하여, 볼 변화시켜 마우스 심근 허혈 및 재관류를 확인한 상기 ECG 파형을 관찰 할 수있다. 쥐의 심장이 네 챔버 구조를 포함 여러면에서 인간의 마음과 유사하지만, 마음도 차이가 있습니다. 성인 인간의 반면 분 (BPM) 당 700 비트입니다 ~ 60 ~ 100 BPM의 8,9 - 하나의 분명한 차이점은 성인 쥐의 평균 휴식 심박수는 600입니다. 또한, 마우스의 재분극 파도, J T는, 종종 탈분극의 QRS 복합체 (10)를 식별 할 명확한 ST 분절 어렵게으로 병합합니다. electrocardiographicall 과정을 복잡y는 그것이 T 파 인간에서 허혈 및 심근 경색 부상의 진단 마커로 사용되는 ST 분절의 상승이다, 심근 허혈을 확인, 임상 내가 nfarction 또는 STEMI yocardial ST 전자 levation의 m라고도합니다. 인간과 쥐의 파형의 주요 차이점 중 하나는 S 파가 바로 음의 T 파에 직접 전송하는 J 파 일 다음이다. 급성 심근 허혈 마우스에서 S 파의 진폭이 감소하고 동안 직접 비정상적인 J 파와 역 T 파 (11)에 의해 이어진다. T 개의 파 쥐 (11)의 재분극의 상당 부분을 표현하지 않는 것 같습니다. 인간의 차이 대 용어와 마우스에도 불구하고, 쥐의 심근 허혈 및 재관류의 ECG 확인은 여전히 ​​가능하고 비교적 간단하다. 파형 해석을 단순화하기 위하여, 상기 SJT의 세그먼트는 ST-61000-4-3 구분이라NT를 여기에. 2013 년에 출판 STEMI 가이드 라인 .This은 동맥 때까지 환자의 관상 동맥 폐쇄의 식별에서 시간 프레임 미만 90 분이어야한다 재개되는 것을 의미 미만 90 분 (12)의 환자 도어 - 투 - 풍선 시간을 권장합니다. 박동 심장은 끊임없이 작동하기 때문에, 높은 산화 대사와 산소 소비 3의 높은 수준을 가지고있다. 이 제공하기 위해, 모세 혈관의 네트워크는 각각의 심근 3 사용할 수 있습니다. 그것은 단지 그 산소와 영양 공급을 방출하기 심장 몇 비트를합니다. 90 분 창에서 인간의 허혈성 심장 지역은 심장이 산소가 풍부한 혈액의 가치가 뛰는 5,400 사이 9,000 수신 차단 된 것입니다. 같은 90 분 창에서 마우스는 54,000 63,000에 심장 박동있을 것입니다. 뮤린 허혈 / 재관류 손상에 대한 실험 시간 포인트 (30)와 60 분 사이에 일반적이다. 개발의 중요성쥐 모델에서 심근 허혈 및 재관류를 확인하는 추가 방법을 보내고은 심근 허혈 / 재관류 연구에서 데이터의 일관성과 재현성에 깊은 의미를 가지고있다. 시각적으로 조직 색상의 변화에 ​​대한 마음을 관찰하는 현재의 관행은 독립형 진단으로 적합하지 않습니다. 또한, 튜브의 제거와 봉합 후 재관류은 보장되지 않습니다. 동맥이 더 이상 해제 연결되어 있지만, 동맥이 절차를 수행하는 동안 지속적인 피해가 없을 수 있습니다 및 재관류 불가능 될 수 있습니다. 오히려 심근 및 rubor의 창백함 (붉은 색)의 관찰에 의존하기보다는 재관류를 확인 심전도 변화의 기록을 갖는 것이 유익 할 것이다. 허혈 / 재관류 손상의 마커를 표시하지 않는 하트는 빠르게 신고 할 수 있고, 진행하는 방법에 대한 결정은 연구자들에 의해 제조 될 수있다. 마지막으로, ECG의 기록을 확립하는 일에 걸쳐베이스 라인에서 변경허혈 및 재관류 기간 전자는 연구자가 초기 수술 후 심장을 계속 모니터링 할 수 있습니다. 수술이 완료 될 때 조사자는 현재 즉시 마음의 시력을 잃게됩니다. ECG는 수술 후 일 심근 시간에 발생하는 변화에 대한 통찰력을 얻을 수있는 간단한 방법입니다. 수술이 늦게 개발 Q-파도가 계속 표시 또는 조직의 죽음을 악화 밝힐 수 후 ECG는 시점에서 기록했다. 그러나, 효과적으로 기준 ECG 비교를 위해 사용할 수 있어야합니다, 신규 또는 악화 심전도 마커 게이지합니다. 12주 세 남성 C57BL / 6 마우스 -이 프로토콜은, 준비를 획득, 8을 사용하여 마우스 심장의 허혈 및 재관류를 확인하기 위해 심전도를 해석하는 방법을 보여줍니다.

<table><tbody><tr><td>Vevo 1100</td><td>Fujifilm Visual Sonics</td><td></td><td>초음파 심전도 기계</td></tr><tr><td>마우스 핸들링 플레이트</td><td>Fujifilm Visual Sonics</td><td></td><td>가열 ECG 플레이트</td></tr><tr><td>Signa-Gel&nbsp;</td><td></td><td></td><td>고전도성 다중</td></tr> <tr><td>전극 젤</td><td>파커</td><td>15-25</td><td>목적 전해질</td></tr><tr><td>Transpore 의료 테이프</td><td>3M</td><td>1527-0</td><td></td></tr><tr><td>PI-Spray II</td><td>제약 혁신</td><td>NDC 36-2013-25</td><td>ECG 플레이트</td></tr><tr><td>C57Bl6 마우스</td> 용 세척제 <td>The Jackson Laboratory</td><td>000664</td><td>Male, 8-12 wk</td></tr><tr><td>IsoThesia-Isoflurane</td><td>Henry Schein</td><td>NDC 1169-0500-1</td><td></td></tr><tr><td>Excel</td><td>Microsoft</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Systane 야간 윤활제 눈 연고</td><td>Alcon</td><td>65050935</td><td></td></tr><tr><td>7-0 Perma-Hand Silk Sutures</td><td>Ethicon</td><td>640.O32</td><td></td></tr><tr><td>5-0 Perma-Hand Silk Sutures</td><td>Ethicon</td><td>K809. O32</td><td></td></tr><tr><td>수술용 가위</td><td>ROBOZ</td><td>RS-5881</td><td></td></tr><tr><td>펜치</td><td>파인 사이언스 도구</td><td>11052-10</td><td></td></tr><tr><td>Gauze</td><td>Bio Nuclear Diagnostics Inc</td><td>DIS-022B</td><td></td></tr><tr><td>바늘 홀더</td><td>파인 사이언스 도구</td><td>12565-14</td><td></td></tr><tr><td>Buprenex CIII&nbsp;</td><td>Patterson Veterinary</td><td>0-891-9756</td><td>부프레노르핀 하이드로클로라이드 진통제&nbsp;</td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Purdue 제품</td><td>67618-150-08</td><td></td></tr><tr><td>Nair</td><td>교회 및 Dwight Co.</td><td>NRSL-22339-05</td><td></td></tr></tbody></table>

표면 패드 심전도를 사용하여 마우스의 심근 허혈 및 재관류 손상의 확인

Confirmation of Myocardial Ischemia and Reperfusion Injury in Mice Using Surface Pad Electrocardiography

전 세계적으로 사망 원인 1위인 심근 리모델링 및 심부전 연구를 위해 많은 동물 모델이 확립되었습니다. 인간의 경우 관상동맥에 병리학적 폐색이 형성되며 폐쇄된 동맥의 재관류는 위험에 처한 심근의 생존력을 유지하는 데 필수적인 것으로 간주됩니다. 심근 회복에 필수적이지만, 허혈성 심근의 재관류는 그 자체로 조직 손상을 일으킵니다. 허혈/재관류 손상의 생리학적 반응과 치유는 만성 폐색 손상과 다릅니다. 심근 허혈/재관류 손상은 심근 경색 연구를 위한 임상적으로 관련된 모델로 인식되고 있습니다. 이러한 이유로 허혈/재관류의 병렬 동물 모델은 심근 손상에 관한 지식 기반을 발전시키는 데 필수적입니다. 일반적으로 좌측 전방 하강(LAD) 관상동맥 폐색 후 마우스 심장의 허혈은 폐색(결찰) 아래 심근의 가시적인 창백함에 의해 확인됩니다. 그러나 이는 서로 다른 심근 부위에 창백함을 유발할 수 있는 여러 주요 동맥이 있기 때문에 정확하거나 일관된 결찰 배치를 확인하는 주관적인 방법일 뿐입니다. 관찰된 심근 창백함을 보완하기 위해 올바른 결찰 배치와 그에 따른 허혈 및 재관류를 평가하기 위해 심전도 변화를 기록하는 방법은 마우스 모델에서 일관된 경색 크기를 산출하는 데 도움이 될 것입니다. 결과적으로 이것은 사용되는 마우스의 수를 줄이는 데 도움이 될 것입니다. 또한 심전도 변화는 수술 후 시간 의존적 방식으로 비침습적으로 계속 기록될 수 있습니다. 이 기사에서는 심근 허혈과 재관류를 실시간으로 심전도로 확인하는 방법을 보여줍니다.

정상 쥐의 ECG가 전기 이벤트 P, Q, R, S, J와 T. P에 대한 알파벳 마커로 그림 2에 표시되어 초기 심방 탈분극입니다. QRS는 심실을 통해 탈분극의 물결입니다. J 조기 재분극이며, T는 복구 (11)로 알려진 이종 재분극을 나타냅니다. 많은 실험실은 ST 분절 10,15-17과 SJT 세그먼트를 참조하는 대신 J 파 명칭을 사용하지 않도록주의해야한다. 여기에, 결과 및 분석은 대표 (40) 쥐의 실험 관찰을 기반으로합니다. 대부분의 마우스는 수술 과정에 걸쳐 유사한 파형 진행을 나타냈다. 유사한 파형을 나타내지 않았다 마우스를 추가 분석을 위해 신고하고 비 경색 동물을 고려 하였다. 유사 파형 결과는 종 외. (15)에 의해보고되었다. 쥐...

쥐 심근허혈/재관류 수술 중 폐색 합자의 올바른 배치는 일반적으로 심근 창백의 육안 관찰에 의해 확인됩니다. 본 명세서에서는 관찰된 심근 창백함을 보충하기 위해 허혈 및 재관류를 심전도로 확인하는 방법이 수컷 C57Bl/6 마우스에서 입증되었습니다.

Many animal models have been established for the study of myocardial remodeling and heart failure due to its status as the number one cause of mortality ...

이 절차의 전반적인 목표는 심전도를 사용하여 마우스의 심근 허혈 및 재관류가 성공적으로 이루어졌는지 확인하는 것입니다. 이 방법은 허혈 재관류 수술의 일관성과 재현성을 높이는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 시간이 많이 소요되는 수술 후 분석 대신, 수술 과정 중에 허혈 및 재관류의 성공 여부를 평가할 수 있다는 점입니다.ECG 패드를 준비한 후, ECG 패드에 있는 4개의 금속 전극 각각에 10센트 동전보다 작은 양의 고전도성 전해질 겔을 도포합니다. 그다음, 마취되어 배와 쪽으로 누운 마우스의 각 발을 테이프 조각으로 누르고, 각 발이 겔 및 전극과 접촉하도록 주의하며 테이프를 ECG 전극에 부착합니다. 이어서, ECG 파형을 실시간으로 시각화할 수 있도록 기기를 설정하고, 필요에 따라 진폭 차이를 고려하여 해상도를 조정합니다.R파의 정점이나 Q파의 저점이 시각적 프레임 밖에 있는 경우, 파형의 전체 높이가 관찰될 때까지 해상도를 조정하십시오. 그런 다음 마우스가 움직이지 않고 접촉되지 않도록 주의하며 ECG 패드 위의 도구들을 제거하고, 동물의 정상적이고 건강한 ECG 기저 파형을 얻으십시오. 허혈 재관류를 수행하려면, 먼저 수술 부위 주변의 털을 제거하고 베타딘과 알코올 용액으로 해당 부위를 소독하는 것부터 시작하십시오.다음으로, 메스를 사용하여 식도와 기관에 평행하게 수직 절개를 가하고, 기관을 덮고 있는 얇은 조직이 노출될 때까지 림프절을 절개창의 양옆으로 조심스럽게 밀어냅니다. 포셉을 사용하여 기관의 흰색 연골 고리가 보일 때까지 조직을 부드럽게 분리합니다. 그런 다음 환기 튜브를 입을 통해 목 방향으로 빠르게 삽입합니다.노출된 목 부위를 통해 튜브의 끝이 보이면, 튜브를 기관의 시작 부분에 맞춥니다. 반투명한 조직을 통해 시각적으로 확인될 때까지 위쪽으로 압력을 가하면서 튜브를 좌우로 부드럽게 흔들어 기관 속으로 밀어 넣습니다. 튜브가 제대로 배치되면, 실 고리를 사용하여 마우스의 앞니 두 개를 걸고 실 끝을 ECG 패드에 테이프로 고정하여 동물의 머리를 안정시키고 수술 중에 환기 튜브가 움직이지 않도록 합니다.그런 다음 환기 튜브를 설치류 인공호흡기에 빠르게 연결하고, 동물의 체중에 맞춰 환기 설정을 조정합니다. 노출된 기관이 건조해지는 것을 방지하기 위해 따뜻한 식염수에 적신 거즈로 덮어줍니다. 이후 메스를 사용하여 흉골의 왼쪽을 따라 수직으로 절개합니다.포셉을 사용하여 근육층에서 근막층을 부드럽게 분리한 다음, 보이는 혈관이 손상되지 않도록 하부 근육층을 조심스럽게 절개합니다. 포셉으로 세 번째 갈비뼈를 위로 부드럽게 들어 올립니다. 그런 다음, 한 손으로 갈비뼈를 잡은 상태에서 외과용 가위를 사용하여 세 번째와 네 번째 갈비뼈 사이의 늑간 조직을 조심스럽게 절개합니다.폐가 수축되면, 포셉을 사용하여 심장을 둘러싸고 있는 얇은 심낭 층을 조심스럽게 분리합니다. 그런 다음 갈비뼈 사이로 심장이 보이도록 갈비뼈의 위치를 조정합니다. 좌심방 이(left atrial auricle)가 쉽게 보이도록 심장 위치를 잡으려면, 생쥐의 왼쪽 뒷발을 오른쪽 뒷발 위에 겹쳐지도록 이동시킵니다.좌심방이 아래에 위치한 좌전강하동맥(LAD)을 찾아, LAD 아래를 통과할 만큼 충분히 깊게, 그러나 좌심실강을 관통하지 않을 정도로 심근에 7-0 silk 테이퍼드 봉합 바늘을 빠르게 삽입합니다. 봉합사의 자유단 끝에 약 4cm 정도가 남을 때까지 봉합사를 잡고, 단순 매듭을 묶기 시작합니다. 봉합사의 자유단이 루프를 통과하여 매듭이 형성되면, 포셉으로 봉합사의 자유단과 바늘 쪽 끝을 모두 잡고, 심외막 표면에 형성된 매듭 아래로 약 1cm 길이의 PE10 튜브 섹션을 삽입합니다.튜브가 제자리에 위치하면, 왼쪽 아래 발을 원래 전극으로 되돌리고 매듭을 조여 PE10 튜브가 심장에 봉합되도록 합니다. ECG 파형이 10초 동안 안정화될 수 있도록 마우스와의 모든 물리적 접촉을 중단하고, 파형을 육안으로 확인하며 이를 폐쇄 시점으로 기록합니다. 그 후, ECG 및 심근 색상 변화가 허혈을 나타내면, PE10 튜브 주변의 봉합사를 이중 매듭으로 묶고 열린 흉강을 따뜻한 식염수를 적신 거즈로 덮어줍니다.허혈 기간이 끝나면 흉강을 덮고 있는 거즈를 제거하고 심장을 시각화합니다. PE10 튜브 상단의 봉합사를 자르고 튜브를 제거한 후, 심근에서 결찰사를 조심스럽게 제거합니다. 마우스와의 모든 물리적 접촉을 중단하고 ECG 파형이 10초 동안 주기적으로 나타나도록 하여, 해당 파형을 재관류 시점으로 기록합니다.실험 종료 시점에 진폭의 변화에 따라 필요한 경우 해상도를 조정하십시오. T파가 변하고 심근이 다시 붉은색으로 돌아와 재관류가 성공적으로 이루어졌음이 확인되면, 수술 중 흉강으로 유입된 과잉 공기를 배출시키기 위해 생쥐의 가슴에 가벼운 압력을 가하면서 5-0 실크 봉합사로 늑간 공간을 봉합하여 흉강을 닫습니다. 그 다음 근육층과 피부를 봉합하고, 모니터링이 가능한 항온 환경에서 생쥐가 완전히 회복되도록 합니다.이 그림은 기저치 측정부터 재관류까지 한 마리 마우스의 경과를 보여주며, 첫 번째 파형은 기록된 기저치에서의 정상 동리듬을 나타냅니다. 두 번째 파형은 결찰사를 묶어 동맥이 폐쇄된 지 1분 후의 ECG를 보여주며, 결찰 전의 기저치 파형과 비교했을 때 상승된 초급성 T파 피크가 관찰됩니다. 세 번째 파형은 5분 시점에서의 완전한 ST 분절 상승을 보여주며, 복합체의 S 부분이 기저치 파형만큼 깊게 음의 방향으로 도달하지 않은 상태에서 J파와 T파로 진행되는 것을 확인할 수 있습니다.허혈 20분 시점에서 QT 간격이 넓어지고 ST 분절은 여전히 상승된 상태이며, 두 구간 모두 45분 시점까지 이러한 상태를 유지합니다. 재관류 5분 후, 깊고 뚜렷한 Q파의 징후가 나타나기 시작하며 T파는 등전위선으로 돌아옵니다. 그러나 30분 후에도 음성 Q파는 여전히 남아 있으며, 이는 영구적인 손상과 더불어 괴사하는 심장 조직이 손상된 부위 주변으로 전류를 굴절시키고 있음을 나타내는 것으로 보입니다.또한, 지속적인 허혈과 손상 및 경색으로의 진행은 일반적으로 영구적인 음성 T파 투영의 강화를 유발합니다. 이 절차를 수행할 때는 동물에게 표시를 하기 전에 기저 상태의 ECG를 측정하는 것이 중요합니다. ECG 분석을 통해 전기적 변화나 이상 징후를 감지할 수 있습니다.심장은 단백질 분석을 통해 프로테오믹 변화를 조사하거나, 조직 염색을 통해 프로테오믹 또는 형태측정학적 변화를 조사하기 위해 추가로 처리할 수 있습니다. 이 영상을 시청한 후에는 심전도를 사용하여 마우스에서 심근 허혈 및 재관류가 성공적으로 이루어졌는지 확인하는 방법을 충분히 이해하게 될 것입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

프로그램된 전기 자극은 심장의 전도 특성을 결정하는 능력, 다양한 서성 거려 프로토콜을 사용하여 심장 arrhythmias를 유도하고 종료할 수있는 가능성을 제공합니다. transvenous 카테터를 사용하여 intracardiac의 electrogram 레코딩은 arrhythmogenic 기판을 확인하기 위해 프로그램된 전기 자극 프로토콜을 다음과 생쥐에서 구할 수 있습니다.

마우스에 프로그램된 전기 자극을

고주파 도플러 초음파는 지역 심근 기능을 평가하기위한 새로운 기술입니다. 이 작품은 심근 스트레인, 국소 빈혈 - reperfused (IR) murine 마음에 DP / DT 및 승모판 병리 현상의 반복 측정이 다양한 이미징 플랫폼의 응용을 보여주는 첫번째 증거를 제공합니다.

고주파 고해상도 Echocardiography : 국소 빈혈 - reperfused Murine 중심부에 심근 스트레인, 수축성 및 승모판 병리 현상의 비침습 반복 측정에 대한 최초의 증거

쥐 실험 심근 경색을 유발하는 데 사용되는 외과 수술은 심장과 왼쪽 폐의 앞쪽 표면을 시각화하기 위해 세 번째와 네 번째 갈비뼈 사이의 왼쪽 thoracotomy로 시작합니다. 왼쪽 관상 동맥이 출혈도 잡았되어 가슴이 폐쇄되고 마우스가 저절로 복구 할 수 있습니다.

마우스의 관상 동맥 결합에 대한 수정 기술

외과 외상은 염증 반응을 유도합니다. 크린 시토킨 및 내생 리간드는 국소 빈혈과 reperfusion에 따라 심근 경색 크기를 조절하는 것으로 알려져 있습니다. 우리는 thoracotomy의 영향을 최소화하기 위해 매달려 가중치를 사용하여 murine 국소 빈혈과 reperfusion의 수정된 폐쇄 가슴 모델을 제시.

심근 국소 빈혈 및 Reperfusion의 Murine 폐쇄 가슴 모델

우리는 재현성을 높이기 위해 좌전 하행 동맥 (LAD)에 결찰의 위치에서 더 명확 수 있습니다 마우스 모델에서 심근 경색 (MI)을 시뮬레이션하기 위해 실험 허혈 / 재관류 (I / R) 손상을 유발하는 수술 방법을 소개합니다 마우스에있는 MI 실험.

왼쪽 앞쪽에 내림차순 동맥의 결찰을 통해 심근 허혈 - 재관류 손상의 생쥐 모델

적절한 마취 하에 쥐의 심장은 늑간 공간을 통해 외부화되었고, 대부분의 실험실에서 쉽게 구할 수 있는 재료를 사용하여 좌측 전방 하행 동맥(LAD)을 결찰하여 심근경색을 성공적으로 유도했습니다.

생쥐의 심근경색 유도를 위한 수정된 간단한 방법

여기서는 미세 조작을 통해 좌측 전방 하행 관상동맥의 정밀 결찰에 의해 마우스에서 심근경색 또는 심근 허혈 재관류 손상을 유도할 수 있는 간단하고 재현 가능한 방법을 설명합니다.

마우스의 심근경색 및 심근 허혈-재관류 손상 유도

본 연구는 생존 사례의 경우 좌측 미니 흉곽 절개술 또는 비생존 사례의 경우 정중선 흉골 절개술을 사용하여 토끼의 급성 국소 심근 허혈 및 재관류 손상의 재현성이 높은 동물 모델을 보여줍니다.

토끼의 허혈 및 재관류 손상 모델

본 프로토콜은 좌측 전방 하행 동맥의 신속하고 정확한 국소화를 위해 수정된 흉골 주위 장축 보기를 설명합니다. 이 접근법은 마우스에서 심근 허혈 재관류 후 관상 동맥 유동 예비력의 동적 변화를 검사하는 동시에 더 간단하고 사용자 친화적으로 설계되었습니다.

생쥐의 심근 허혈 재관류 후 관상 동맥 흐름 예비력의 동적 평가

이 기사에서는 마우스에서 심근 허혈 재관류 손상(IRI)을 유도하기 위한 독특한 폐쇄 흉부 기술을 제시합니다. 제시된 방법은 마우스가 자발적으로 숨을 쉬면서 원격으로 심근 허혈을 유도할 수 있도록 합니다. 이를 통해 비침습적 이미징을 통해 현장에서 실시간으로 허혈 및 재관류의 동적 과정을 연구하기 위해 동물에 액세스할 수 있습니다.

자발적으로 호흡하는 마우스에서 풍선 카테터를 사용하여 원격으로 트리거된 LAD 폐색

학습하세요 마우스 심근 허혈 및 재관류 손상 확인을 위한 표면 패드 심전도 기법. 실시간 ECG 모니터링으로 수술 정확성과 재현성을 향상시키고, 수술 후 분석 없이 즉각적인 허혈 및 재관류 확인이 가능합니다.

표면 패드 심전도를 사용하여 마우스의 심근 허혈 및 재관류 손상의 확인

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