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Identification fiable de la vie Neurones Dopaminergiques dans les cultures Mésencéphale utilisant l'ARN Séquençage et TH-promoteur-driven eGFP Expression
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JoVE 신문 신경과학
Reliable Identification of Living Dopaminergic Neurons in Midbrain Cultures Using RNA Sequencing and TH-promoter-driven eGFP Expression
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Identification fiable de la vie Neurones Dopaminergiques dans les cultures Mésencéphale utilisant l'ARN Séquençage et TH-promoteur-driven eGFP Expression

DOI:
10.3791/54981-v

•

10:54 min

•

February 10, 2017

•

, , , , , , ,
1Division of Biology and Biological Engineering,California Institute of Technology (Caltech)

Chapters

  • 00:05Title
  • 00:59Isolation of Embryonic Midbrain
  • 02:55Dissociation and Plating of Cells
  • 05:34Harvesting Cultured Dopaminergic Neurons for RNA Sequencing
  • 07:04Generation, Purification and Amplification of First-strand cDNA
  • 09:13Results: RNA-seq Detection of Expressed Transcripts in Single Dopaminergic Neurons
  • 09:39Conclusion

Summary

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Dans la maladie de Parkinson (PD), substantia nigra (SNC) neurones dopaminergiques dégénèrent, entraînant un dysfonctionnement du moteur. Nous rapportons ici un protocole pour la culture de neurones mésencéphaliques ventraux provenant d'une souris exprimant eGFP entraînée par une séquence de promoteur de tyrosine-hydroxylase (TH), la récolte des neurones fluorescents individuels à partir des cultures, et en mesurant leur transcriptome en utilisant l'ARN-seq.

Tags

Keywords: RNA SequencingTyrosine HydroxylaseEGFPDopaminergic NeuronsMidbrain CulturesParkinson’s DiseaseDrug AddictionVentral MesencephalonVentral Tegmental AreaSubstantia NigraDissection

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