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A identificação fiável de Vida neurônios dopaminérgicos em culturas mesencéfalo Usando RNA Sequenciamento e TH-driven-promotor eGFP Expression
JoVE 신문
신경과학
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JoVE 신문 신경과학
Reliable Identification of Living Dopaminergic Neurons in Midbrain Cultures Using RNA Sequencing and TH-promoter-driven eGFP Expression
DOI:

10:54 min

February 10, 2017

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Chapters

  • 00:05Title
  • 00:59Isolation of Embryonic Midbrain
  • 02:55Dissociation and Plating of Cells
  • 05:34Harvesting Cultured Dopaminergic Neurons for RNA Sequencing
  • 07:04Generation, Purification and Amplification of First-strand cDNA
  • 09:13Results: RNA-seq Detection of Expressed Transcripts in Single Dopaminergic Neurons
  • 09:39Conclusion

Summary

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Na doença de Parkinson (PD), substância negra (SNC) neurónios dopaminérgicos degenerar, conduzindo a disfunção motora. Aqui nós relatamos um protocolo para a cultura de neurônios do mesencéfalo ventral de um ratinho expressando eGFP impulsionado por uma sequência de promotor de tirosina hidroxilase (TH), a colheita neurônios fluorescentes individuais das culturas, e medir o seu transcriptoma usando RNA-seq.

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