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방사성 표지 된 ATP로 단백질 키나아제 활성 측정

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생화학

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JoVE 신문 생화학

Assaying Protein Kinase Activity with Radiolabeled ATP

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방사성 표지 된 ATP로 단백질 키나아제 활성 측정

DOI:

10.3791/55504-v

•

08:05 min

•

May 26, 2017

•

Aroon S. Karra, Steve Stippec, Melanie H. Cobb

¹Department of Pharmacology,University of Texas Southwestern Medical Center

Chapters

00:05Title
00:36Kinase Purification Resources and General Immunoprecipitation Pipeline
01:49Kinase Reactions and SDS-PAGE
02:45Gel Staining and Drying
04:18Autoradiogram and Scintillation Counts
05:57Results: Differences in Activity Between ERK2 and ERK2 Mutants
07:02Conclusion

Summary

자동 번역

단백질 키나아제는 고도의 진화 된 신호 효소 및 세포 내 및 세포 내 신호 전달에 중요한 발판이다. 우리는 세포 표지 조절의 해명에 도움이되는 신뢰할 수있는 방법 인 방사성 표지 된 아데노신 3 인산염 ([γ- ³² P] ATP)의 사용을 통해 키나아제 활성을 측정하기위한 프로토콜을 제시한다.

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Keywords: Protein Kinase Activity Radiolabeled ATP Kinase Signaling Kinase Assay Cell Lysates Protein A-Sepharose Beads Kinase Reaction Buffer SDS-PAGE Coomassie Stain Autoradiography

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