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Expressão de Proteína Recombinante, Cristalização e Estudos Biofísicos de<em> Bacillus</em> -conservado Nucleotide Pyrophosphorylase, BcMazG
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JoVE 신문 생화학
Recombinant Protein Expression, Crystallization, and Biophysical Studies of a Bacillus-conserved Nucleotide Pyrophosphorylase, BcMazG

Expressão de Proteína Recombinante, Cristalização e Estudos Biofísicos de<em> Bacillus</em> -conservado Nucleotide Pyrophosphorylase, BcMazG

DOI:
10.3791/55576-v

•

12:23 min

•

May 16, 2017

•

, ,
1Division of Biological Science and Technology,Yonsei University

Chapters

  • 00:05Title
  • 00:55Recombinant Protein Production and Purification of rBC1531
  • 04:47Removal of Affinity Tags by Thrombin Proteolysis
  • 06:32Crystallization Screening and Optimization of rBC1531
  • 07:30Colorimetric NTPase Assay
  • 08:33Results: Purification, Characterization, and Crystallization of rBC1531
  • 10:31Conclusion

Summary

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Bacillus anthracis é o agente patogénico obrigatório do antraz mortal por inalação, pelo que os estudos dos seus genes e proteínas são rigorosamente regulados. Uma abordagem alternativa é estudar genes ortólogos. Descrevemos estudos biofísico-químicos de um ortólogo de B. anthracis em B. cereus , bc1531, requerendo equipamento experimental mínimo e sem preocupações de segurança graves.

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Recombinant ProteinBacillusNucleotide PyrophosphorylaseBcMazGProtein ExpressionProtein CrystallizationBiophysical StudiesE. ColiChemically Competent CellsTransformationPlasmid DNADNA SequencingProtein PurificationIPTG InductionCell LysisProtein Characterization

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