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El intestino C. elegans como modelo una morfogénesis Lumen intercelular y En Vivo biogénesis de la membrana polarizada a nivel unicelular: etiquetado de anticuerpos, ARNi pérdida-de-función análisis y proyección de imagen de
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JoVE 신문 발생학
The C. elegans Intestine As a Model for Intercellular Lumen Morphogenesis and In Vivo Polarized Membrane Biogenesis at the Single-cell Level: Labeling by Antibody Staining, RNAi Loss-of-function Analysis and Imaging
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El intestino C. elegans como modelo una morfogénesis Lumen intercelular y En Vivo biogénesis de la membrana polarizada a nivel unicelular: etiquetado de anticuerpos, ARNi pérdida-de-función análisis y proyección de imagen de

DOI:
10.3791/56100-v

•

12:15 min

•

October 03, 2017

•

, , , , , ,
1Mucosal Immunology and Biology Research Center, Developmental Biology and Genetics Core, Massachusetts General Hospital,Harvard Medical School, 2College of Life Sciences,Jilin University, 3Faculty of Health Sciences,University of Macau

Chapters

  • 00:05Title
  • 01:24Introduction to the Accompanying Publication
  • 02:47Nematode Fixation
  • 04:19Nematode Antibody Staining
  • 06:33Applying RNAi to Nematodes Using a Feeding Protocol
  • 07:57Analyzing Phenotypes Using Fluorescence Dissecting Microscopy
  • 08:41Analyzing Phenotypes Using Confocal Microscopy
  • 10:14Results: Immunohistochemistry, RNAi and Microscopic Analysis of Intestinal Apical membrane and Lumen Morphogenesis
  • 11:45Conclusion

Summary

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La transparente C. elegans intestino puede servir como una"en vivo cámara de tejido" para el estudio de apicobasal membrana y lumen biogénesis a nivel unicelular y subcelular durante tubulogenesis multicelulares. Este protocolo describe cómo combinar etiquetas estándar, genética/pérdida de función RNAi y enfoques microscópicos para diseccionar estos procesos a nivel molecular.

Tags

C. ElegansIntestineIntercellular LumenMembrane BiogenesisPolarized MembraneSingle-cell LevelAntibody StainingRNAiLoss-of-function AnalysisImagingMorphogenesisApical MembraneBasolateral MembranePolarityTubulogenesisExcretory CanalTransgenic AnimalsFluorescent Fusion ProteinsLive ImagingImmunohistochemistryMembrane MarkersPromoters

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