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एक मानक पद्धति पर जांच करने के लिए साइट Mutagenicity के एक समारोह के रूप में बिंदु उत्परिवर्तन मरंमत Catalyzed द्वारा CRISPR/Cas9 और SsODN मानव कोशिकाओं में
JoVE 신문
유전학
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JoVE 신문 유전학
A Standard Methodology to Examine On-site Mutagenicity As a Function of Point Mutation Repair Catalyzed by CRISPR/Cas9 and SsODN in Human Cells
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एक मानक पद्धति पर जांच करने के लिए साइट Mutagenicity के एक समारोह के रूप में बिंदु उत्परिवर्तन मरंमत Catalyzed द्वारा CRISPR/Cas9 और SsODN मानव कोशिकाओं में

DOI:
10.3791/56195-v

•

10:07 min

•

August 25, 2017

•

,
1Gene Editing Institute, Helen F. Graham Cancer Center and Research Institute,Christiana Care Health Services, 2Department of Medical Sciences,University of Delaware

Chapters

  • 00:05Title
  • 00:38Cell Line, Culture Conditions, and Harvest
  • 01:57Plating the Cells and Releasing Them from Aphidicolin Synchronization
  • 02:44RNA Complexing
  • 04:13Harvesting the Cells for Targeting
  • 05:30Targeting Samples
  • 06:13Analysis of Gene Edited Cells and Transfection Efficiency
  • 06:57DNA Sequence Analysis
  • 07:56Results: Effective Point Mutation Repair
  • 09:41Conclusion

Summary

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इस प्रोटोकॉल स्तनधारी कोशिकाओं में बिंदु उत्परिवर्तनों की मरंमत के लिए एक CRISPR/Cas9 आधारित जीन संपादन प्रणाली के कार्यप्रवाह रूपरेखा । यहां, हम एक विस्तृत का पालन के साथ जीन संपादन के लिए एक मिश्रित दृष्टिकोण का उपयोग करें-लक्ष्य साइट पर indel गठन को मापने के लिए प्रयोगात्मक रणनीति पर-संक्षेप में, ऑनसाइट mutagenesis का विश्लेषण ।

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Keywords: CRISPR/Cas9SsODNOn-site MutagenesisHomology Directed RepairGene CorrectionHTT116 CellsTrypan BlueHemocytometerAphidicolinEGFP GeneGuide SequencesCrRNATracrRNA

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