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Um método alternativo de cultura para manter Hypomethylation genômico das células-tronco embrionárias Mouse usando MEK inibidor PD0325901 e vitamina C
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JoVE 신문 생화학
An Alternative Culture Method to Maintain Genomic Hypomethylation of Mouse Embryonic Stem Cells Using MEK Inhibitor PD0325901 and Vitamin C

Um método alternativo de cultura para manter Hypomethylation genômico das células-tronco embrionárias Mouse usando MEK inibidor PD0325901 e vitamina C

DOI:
10.3791/56391-v

•

11:53 min

•

June 01, 2018

•

, ,
1State Key Laboratory of Environmental Chemistry and Ecotoxicology, Research Center for Eco-Environmental Sciences,Chinese Academy of Sciences

Chapters

  • 00:04Title
  • 00:57Grow Mouse ES Cells on Gelatin-coated Dishes
  • 02:48Extract DNA from Cells and Enzymatic Digestion of DNA into Single Nucleosides
  • 05:29Analyze 5mC and 5hmC Using UHPLC-MS/MS
  • 08:34Results: Methylation Status of Mouse Embryonic Stem Cells
  • 10:17Conclusion

Summary

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Descrevemos em detalhes dois protocolos de base química para cultivo de células-tronco embrionárias do mouse. Esse novo método utiliza mecanismos sinérgicos de promover oxidação mediada por Tet (vitamina C) e reprimindo a síntese de novo de 5-metilcitosina (por PD0325901) para manter o DNA hypomethylation e pluripotência das células-tronco embrionárias do mouse.

Tags

Mouse Embryonic Stem CellsGenomic HypomethylationMEK Inhibitor PD0325901Vitamin CCulture MethodDNA ExtractionDNA MethylationPluripotencyHeterogeneityMorphologyUndifferentiated State

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