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Proteoma profonda profilatura di etichettatura isobarico, vasto cromatografia liquida, spettrometria di massa e quantificazione assistita da Software
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JoVE 신문 생화학
Deep Proteome Profiling by Isobaric Labeling, Extensive Liquid Chromatography, Mass Spectrometry, and Software-assisted Quantification
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Proteoma profonda profilatura di etichettatura isobarico, vasto cromatografia liquida, spettrometria di massa e quantificazione assistita da Software

DOI:
10.3791/56474-v

•

10:37 min

•

November 15, 2017

•

, , , , , , ,
1St. Jude Proteomics Facility,St. Jude Children’s Research Hospital, 2Departments of Structural Biology and Developmental Neurobiology,St. Jude Children’s Research Hospital, 3Heilongjiang University of Chinese Medicine

Chapters

  • 00:05Title
  • 01:00Preparation of Cells/Tissues
  • 01:45Protein Extraction, Quality Control Western Blotting, In-solution Digestion, and Peptide Desalting
  • 04:45TMT Labeling of Peptides
  • 05:50Extensive High-resolution, Basic pH LC Prefactionation
  • 06:43LC-MS/MS Preparation and Parameters
  • 07:41Results: Deep Proteome Profiling Analysis
  • 08:45Conclusion

Summary

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Vi presentiamo un protocollo per quantificare con precisione le proteine con etichettatura isobarico, vasto frazionamento, strumenti di bioinformatica e procedura di controllo di qualità in combinazione con cromatografia liquida interfacciato ad uno spettrometro di massa ad alta risoluzione.

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Keywords: Proteome ProfilingIsobaric LabelingLiquid ChromatographyMass SpectrometryQuantificationProtein IdentificationProtein QuantitationBiomarker DiscoveryCell LysisProtein DigestionAcetonitrileLys-C ProteaseDTTHEPES

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