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Un dosage Simple journaliste Fluorescence pour identifier les composants cellulaires nécessaires à la ricine toxine une chaîne (RTA) traite des levures
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JoVE 신문 생물학
A Simple Fluorescence-based Reporter Assay to Identify Cellular Components Required for Ricin Toxin A Chain (RTA) Trafficking in Yeast
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Un dosage Simple journaliste Fluorescence pour identifier les composants cellulaires nécessaires à la ricine toxine une chaîne (RTA) traite des levures

DOI:
10.3791/56588-v

•

09:03 min

•

December 15, 2017

•

,
1Molecular and Cell Biology, Department of Biosciences and Center of Human and Molecular Biology (ZHMB),Saarland University

Chapters

  • 00:05Title
  • 00:46Heterologous Expression of His-tagged RTA in E. coli
  • 02:12Purification of His-tagged RTA via Affinity Chromatography
  • 04:21Yeast Transformation and Cell Wall Removal
  • 05:28GFP Reporter Assay Measurement in 96-well Plates
  • 06:57Results: Assay to Identify Cellular Components Required for RTA Trafficking in Yeast
  • 08:30Conclusion

Summary

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Dans le manuscrit, nous décrivons l’utilisation d’un essai de journaliste de fluorescence à base de levure pour identifier les composants cellulaires impliqués dans le trafic et de tuer les processus de la cytotoxique une sous-unité de la ricine de toxine végétale (RTA).

Tags

Keywords: Fluorescence-based Reporter AssayRicin Toxin A Chain (RTA)YeastCellular ComponentsTraffickingIntercellular TransportRibosomeCytotoxic SubunitPlasma MembraneCytosomeCell TransformationLB Kanamycin MediumOptical DensityIPTGCentrifugationBinding BufferSonicationAffinity PurificationNickel-based ColumnHIS-tagged RTA

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