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Metodo per l'etichettatura di trascrizioni in cellule individuali Escherichia coli per singola molecola di fluorescenza In Situ gli esperimenti di ibridazione
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JoVE 신문 생물학
Method for Labeling Transcripts in Individual Escherichia coli Cells for Single-molecule Fluorescence In Situ Hybridization Experiments
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Metodo per l'etichettatura di trascrizioni in cellule individuali Escherichia coli per singola molecola di fluorescenza In Situ gli esperimenti di ibridazione

DOI:
10.3791/56600-v

•

07:51 min

•

December 21, 2017

•

, ,
1Department of Physics of Complex Systems,Weizmann Institute of Science

Chapters

  • 00:05Title
  • 00:42Sample Fixation
  • 02:22Sample Permeabilization
  • 03:10Hybridization
  • 04:26Washing
  • 05:03Sample Preparation for Imaging
  • 06:12Results: Representative Results of Two Different Transcripts Labeled by the smFISH Method
  • 07:25Conclusion

Summary

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Questo manoscritto descrive un metodo per l'etichettatura individuale RNA messaggero (mRNA) trascrizioni con sonde di DNA fluorescente etichettati, per l'uso in singola molecola fluorescenza in situ (smFISH) gli esperimenti di ibridazione in Escherichia coli. smFISH è un metodo di visualizzazione che permette la rilevazione simultanea, la localizzazione e quantificazione delle singole molecole di mRNA in singole celle fisse.

Tags

Escherichia ColiSingle-molecule Fluorescence In Situ Hybridization (smFISH)TranscriptsCell-to-cell VariabilityCell Wall LocalizationLB MediumOptical DensityPBSFixation BufferPermeabilizationEthanolWash BufferOligonucleotide Probe SetHybridization Buffer

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