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Produzione efficiente e identificazione di CRISPR/Cas9-generato Gene Ko nel sistema modello Danio rerio
JoVE 신문
유전학
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JoVE 신문 유전학
Efficient Production and Identification of CRISPR/Cas9-generated Gene Knockouts in the Model System Danio rerio
DOI:

11:27 min

August 28, 2018

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Chapters

  • 00:05Title
  • 01:09Preparation of CRISPR-reagents for Embryo Microinjection
  • 04:03Microinjection of CRISPR-components into Zebrafish Embryos
  • 06:12Analysis of Efficiency of Indel Formation Using an HMA
  • 08:45Identification and Propagation of Knock-out Lines
  • 09:45Results: Zebrafish Embryos Exhibit a Pigment Defect when Injected with an sgRNA Targeting Tyrosinase at the One Cell Stage
  • 10:32Conclusion

Summary

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L'editing genomico mirato nel sistema modello Danio rerio (pesce zebra) notevolmente è stata facilitata dall'emergere di approcci basati su CRISPR. Qui, descriviamo un protocollo semplificato, robusto per la generazione e l'identificazione degli alleli di assurdità CRISPR-derivato che incorpora l'analisi di mobilità dell'eteroduplex e identificazione delle mutazioni mediante sequenziamento di nuova generazione.

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