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Ingeniería 'Oro' de la fluorescencia por presión selectiva incorporación de aminoácidos no canónica y análisis de proteínas por espectrometría de masas y la fluorescencia
JoVE 신문
생체공학
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JoVE 신문 생체공학
Engineering ‘Golden’ Fluorescence by Selective Pressure Incorporation of Non-canonical Amino Acids and Protein Analysis by Mass Spectrometry and Fluorescence
DOI:

11:51 min

April 27, 2018

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Chapters

  • 00:05Title
  • 01:46Recombinant Protein Expression
  • 04:05Target Protein Purification via Immobilized Metal Ion Affinity Chromatography
  • 05:20Intact Protein Mass Analysis by High-performance Liquid Chromatography Coupled to Electrospray Ionization Time-of-flight Mass Spectrometry
  • 06:38Fluorescence Lifetime Measurements and Decay-associated Spectra of GdFP
  • 07:59Results: Gold Fluorescent Protein Analysis by Mass Spectrometry and Fluorescence
  • 10:13Conclusion

Summary

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Biología sintética permite la ingeniería de proteínas con propiedades sin precedentes mediante la inserción co-translational de aminoácidos no-canónico. Aquí, se presenta como una variante espectralmente rojo-cambiado de puesto de un fluoróforo tipo GFP con propiedades espectroscópicas fluorescencia novela, llamado proteína fluorescente de "oro" (GdFP), se produce en e. coli mediante incorporación de presión selectiva (SPI).

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