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Un test Simple, Rapid et Quantitative à la mesure de réparation d’ADN-protéine Crosslinks sur des plasmides transfectés dans des cellules de mammifères
JoVE 신문
유전학
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JoVE 신문 유전학
A Simple, Rapid, and Quantitative Assay to Measure Repair of DNA-protein Crosslinks on Plasmids Transfected into Mammalian Cells
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Un test Simple, Rapid et Quantitative à la mesure de réparation d’ADN-protéine Crosslinks sur des plasmides transfectés dans des cellules de mammifères

DOI:
10.3791/57413-v

•

11:58 min

•

March 05, 2018

•

,
1Department of Pharmacology,University of Minnesota

Chapters

  • 00:04Title
  • 01:18Generation of DNA-protein Crosslink Containing Plasmid
  • 06:21Transfection into Mammalian Cells
  • 08:39SSPE-qPCR
  • 10:02Results: Use of Strand-specific Primer Extension Based q-PCR to Quantify the DNA-protein Crosslinks
  • 11:08Conclusion

Summary

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Le but du présent protocole est de quantifier la réparation des définis ADN-protéine crosslinks sur l’ADN de plasmide. Les plasmides lésés sont transfectés dans des lignées cellulaires de mammifères bénéficiaires et de faible poids moléculaire récoltée à plusieurs temps points après transfection. Cinétique de réparation de l’ADN sont quantifiées par extension d’amorce de volet spécifique suivie de qPCR.

Tags

Keywords: DNA-protein CrosslinksPlasmid DNAMammalian CellsDNA RepairTrans-Pacific Primer Extension QPCR AssayAdductsPolymerase BlockingHouse Cell Reactivation8-oxoguanineT4 Polynucleotide KinasePrimer ExtensionPhenol-chloroform Extraction

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