Name: 무척 추 동물 모델 시스템으로 독성 테스트 실험실에서 초파리 를 사용 하 여 실험 프로토콜 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min
Description: 학습하세요 Drosophila를 활용한 환경독성물질 노출 프로토콜로 다양한 발달단계와 세대에 걸친 적응도 영향을 평가하는 방법입니다. 이 기법은 생태학적 및 건강 위험 평가 연구에 활용됩니다.

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이 게시는 교육부에서 교부 금에 의해 지원 되었다 (홍보 수상 #P031C160025-17, 프로젝트 제목: 84.031 C) 활성 줄기 구축 참여 (C-베이스)는 콜로라도 주립 대학-토 인 부락 (CSU-남) 지역 사회. 현재 동물학 감사와 대표적인 결과 사용할 수 있는 권한을 제공 하는 Elsevier 출판 정돈의 편집자 뿐 아니라 이전 서류,이 프로토콜을 게시할 수 있는 기회를 제공에 대 한. 우리는 또한 토마스 Graziano, 박사 버나드 Possidente (학과 생물학, Skidmore 대학), 그리고 박사 클레어 Varian 라모스 C 기반 프로그램, 박사 브라이언 Vanden Heuvel (C 기반 및 학과 생물학, CSU-남), CSU 푸에블로 생물학과, 감사 하 고 싶습니다. (학과 생물학, 콜로라도 주립 대학-토 인 부락) 그들의 지원과 도움.

다음 프로토콜은 독 소의 구강 섭취가 적절 한; 때 오염된 매체에 초파리 속에서 후방에 사용 되는 실험 프로토콜 노출의 다른 형태는 초파리 모델11,15,,1626를 사용 하 여 가능 합니다. 이 프로토콜에서 설명 하는 방법 이전 허쉬 외. 으로 설명 되었습니다. 19 와 피터슨 외. 23 , 24 , 25.
1. 연구 실험실에서 초파리 의 주식 인구를 설정
<ol><li>일정 온도, 빛: 다크 사이클 및 테스트 종의 환경 설정에 따라 습도 부 화기를 설정 하 여 초파리 의 집 주식 인구는 환경 제어 인큐베이터 (또는 작은 방)을 설정 합니다. 참고: 기본 환경 조건 연구에 대 한 선택한 종족의 기본 생태에 따라 달라 집니다. 예를 들어 D. melanogaster 이남의 아프리카27 기본 이며 25 ° C, 12시 12분 빛: 다크 사이클, 그리고 약 60% 습도16,18,,1920 에서 일반적으로 유지 관리 , 21 , 22 , 23 , 24 , 25 , 28 , 29 , 30. 디 몬타나 범위 대부분의 캐나다 및 midwest 미국, 많은 추운 지역에 걸쳐 확장 하는 다른 한편으로, 따라서, 디 몬타나 19-20 ° C 그리고 때로는 24 시간 빛 정권 짝짓기 시즌31동안 조건을 시뮬레이션에서 일반적으로 유지 됩니다. 초파리의 다양 한 수 종의 지리적인 범위의 자세한 설명에 대 한 초파리 Speciation 패턴 웹사이트32를 참조 하십시오.</li>
	<li>
어느 주식 센터에서 선호 초파리 종 또는 타고 난된 라인을 얻기 (재료의 표 참조), 요청, 또는 수집 야생 현장에서 유전자 변수 인구에 따라 다른 연구소. 참고: 다음 단계는 연구 실험실에서 유지 하기 위해 초파리 의 유전자 변수, 인구를 수집 하는 방법을 설명 합니다. 이러한 방법은 한 미끼 소스와 대상 특정 종 보다 다양 한 종족을 한 번에 수집 하 Markow 고 O'Grady33 와 베르너와 Jaenike34 에서 수정 되었습니다.<ol>
<li>대여섯 익은 바나나는 냉장고에 하룻밤 동결 하 고 미끼 트랩을 설정 하기 전에 서 리 없애다.</li>
		<li>파리 미끼 병에 탈출 하지 캡처할 수 있도록 병 앞 u 자 모양의 슬릿을 절단 하 여 여러 1-2 L 플라스틱 병을 준비 합니다. 파리는 뚜껑을 통해 이스케이프 하지 않습니다 그래서 그들의 병 뚜껑을 가진 플라스틱 병 모자.</li>
		<li>추가 defrosted 바나나 병의 바닥에 약 1 인치 바나나의 병의 하단에 포함 되어 있습니다. 병에 잘 익은 토마토 슬라이스를 놓습니다. 있도록 바나나 효 모 슬러리에 흡수 되 면 병의 바닥에 바나나를 효 모 슬러리 (맥주 만드는 과정에서 남은 효 모)를 추가 합니다.</li>
		<li>그래서 파리는 효 모 슬러리와 바나나에 걸어 깨끗 한 기판 병 (수직 수직 위치)에 나무 막대기를 추가 합니다. 그림 1 에서는 이러한 방법의 최종 제품을 보여 줍니다.</li>
		<li>잠시 미끼 나무에서 밤새 병과 24 h. 입 aspirate 모든 병 날아 확인 그리고 개별적으로 iso 여성 라인을 만드는 매체와 튜브에 여성을 배치. 그러나 참고: 다중 여성 라인 만들 수 있습니다,, 경우에 각 종족의 암컷을 명확 하 게 확인 될 수 있다. 또한, 파리 속 초파리 내 다른 생태 틈새를 점유 하 고 그 틈새 (베르너와 Jaenike34);에 따라 다른 식이 요구 해야한다 다이어트 권장 사항 및 음식 요리법 베르너와 Jaenike34 을 참조 하십시오.</li>
		<li>수집 된 초파리 의 종 식별 해 부 현미경 아래 성인 F1 자식 검사 (Markow 및 O'Grady33 및 다양 한 수 종 식별에 베르너와 Jaenike34 참조 ).</li>
	</ol>
</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57450/57450fig1.jpg"> 그림 1 : 트랩 및 미끼 필드에 초파리 의 강포한 인구를 수집 하는 데 사용의 그림 표현. (A) 플라이 트랩 콜로라도에 로컬 필드 사이트에서 설정 합니다. (B)는 파리의 가까이 보기가 필드 사이트 설정 트랩. <a href="/files/ftp_upload/57450/57450fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<ol start="3"><li>Iso-여성 또는 보육 환경 제어 또는 일정 한 온도 빛: 다크 사이클, 습도에 다 여성 라인을 유지 합니다. 이렇게 하려면 집 튜브에서 파리 또는 병에 매체 그리고 매체에 계란을 낳 기 위해 벗 여성을 허용. 애벌레와 번데기의 존재에 대 한 튜브를 모니터링 합니다. 참고: 파리 속 초파리 내 다른 생태 틈새를 점유 하 고 다른 식이 요구 사항 및 그 틈새33,34에 따라 환경 비 생물 적인 환경 설정을 해야한다. 환경 및 식이 권장 (환경과 비행 축산에 대 한 추가 지침) 과천시와 밀러28에서 찾을 수 있습니다 섀 퍼 외. 29, stocker 및 용감한30, Markow 및 O'Grady33, 그리고 베르너와 Jaenike34. 야생 종에 사용 하 여, 종 확인 될 수 있다 때까지 로컬 환경 조건은 인큐베이터에서 시뮬레이션할 수 있습니다.</li>
	<li>신선한 매체 주식을 자주 전송, 건강 한 라인을 유지 하 고 진드기에서 감염을 방지 하 오래 된 튜브를 삭제. 참고: 전송의 주파수는 종의 라이프 사이클에 따라 달라 집니다. 예를 들어 전송 초파리 melanogaster 2 주마다 신선한 매체. 실험실에서 라인을 유지에 관한 자세한 내용은 랜드 외를 참조 하십시오. 16, 과천시와 밀러28, 섀 퍼 외. 29, stocker 및 용감한30, 그린스펀35및 과학 교육 데이터베이스36.</li>
</ol>2. 후면 초파리 오염된 매체에
참고: 처음 또는 새로운 contaminant(s)와 초파리 실험실에서 테스트를 하는 경우 식별 치명적인 복용량 (참조 Castaneda 외. 37 그리고 Massie 외. 방법에 대 한 38 )와 LD50 (Castaneda 외를 참조 하십시오. 37 Akins 외. 방법에 대 한 39 ) 첫 번째. 그런 다음 원하는 phenotypic 출력;에 대 한 생물학 관련 농도 식별 하는 복용량 응답 곡선을 실행 허쉬 외를 참조 하십시오. 19 와 저 우 외. 40 방법에 대 한입니다.
<ol><li>오염 물질의 화학에 따라 원하는 concentration(s)에서 오염 된 매체의 재고 솔루션을 준비 합니다. 참고: 예: PbAc의 재고 솔루션을 준비: 오염 물에 도달 원하는 농도 매체까지 증류수 (dH20)를 오염 물질을 추가 하 여 납 아세테이트 (PbAc) 매체의 재고 솔루션을 준비. 예를 들어 1000 µ M의 재고 솔루션 PbAc, 준비 될 수 있다 1000 µ M에 도달할 때까지 PbAc dH20을 추가 하 여 PbAc. 또한, 원하는 농도를 재고 솔루션 (예: 는 1000 µ M PbAc 솔루션)를 희석 (500 µ M 같은 PbAc) 재고 또한 이러한 솔루션을 유지 하 고.</li>
	<li>매체, 제어 매체 역할을 다음 제조 업체의 지침을 준비 합니다. 추가 매체, 다음 제조 업체의 지침; 준비 그러나, 보충 dH20 오염 솔루션을 준비. 참고: 예를 들어 인스턴트 초파리 매체를 사용 하는 경우 추가 약 1 작은 술 인스턴트 중간 플라스틱 병을. 매체를 약 5-5.5 mL dH20을 추가 합니다. 라이브 베이커의 효 모 제어 매체 준비의 몇 알갱이 뿌려. 실험적인 매체를 준비 하려면 재고 솔루션을 보완 (500 µ M 같은 PbAc) dH20.</li>
	<li>
컨트롤 및 실험 매체에 전송 주식 인구에서 재생산으로 가능한 성숙한 남성과 여성. 참고: 생식 성숙 시간 후 일수로 초파리 종41사이 다르다.<ol>
<li>부드럽게 지배적인 손으로 아래로 재고 파리의 유리병을 누릅니다. 파리 자동으로 유리병의 하단으로 이동 확인 하십시오. 다른 한편으로는, 유리병을 도청 하는 동안 유리병의 뚜껑을 제거 하 고 컨트롤 또는 오염 된 매체의 신선한 유리병 파리와 유리병 위에 배치. 튜브를 함께 누른 뒤집어 그들, 부드럽게 도청, 파리 제어 또는 오염 된 매체의 신선한 유리병에 자동으로 전송 되도록 합니다. 아직도 파리와 유리병 도청, 하는 동안 유리병을 모자.</li>
		<li>표준화 각 유리병에 파리의 수를 확인 하 고 더 많은 튜브와 반복. 참고: 성인의 총 수 이전을 통해 전송 또는 마 취과 밀을 방지 하는 데 사용 하는 튜브의 크기에 따라 달라 집니다.</li>
		<li>표준 환경 조건 (즉, 인큐베이터)에 성인을 품 어 고 성인 친구 및 24-96 h에 대 한 매체에 알 수 있습니다.</li>
		<li>성인 자료실 (미네랄 오일으로 가득 하 고 꽉 끼는 깔때기와 플라스 크)에서 삭제 후 24-96 h, 계란 (실험 과목 나중 될) 테스트를 위한 성숙 수정 된 뒤에 남겨두고. 개발을 알 수 있도록 인큐베이터에 튜브를 놓습니다.</li>
		<li>매체에서 나오는 애벌레를 찾아 방황 탈피 애벌레에 대 한 튜브를 모니터링 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. 다양 한 발달 단계에 실험 과목을 수집 합니다.
참고: 실험 과목 어떤 발달 단계, 맹인 코딩된 15 mL 원뿔 튜브에 배치 하 고 축적에 대 한 테스트에서 수집 된 수. 있습니다 오염 물질의 축적을 테스트 하기 위한 방법을 공부 되 고 오염 물질에 따라 달라 집니다. 예를 들어 PbAc의 축적 Inductively-Coupled 플라즈마 질량 분석 (ICP-MS)42를 사용 하 여 테스트할 수 있습니다. 또한, 실험 과목 다양 한 오염 물질의 phenotypic 효과 대 한 테스트할 모든 발달 단계에서 수집 된 수 있습니다. 그림 2 43 초파리 수명 주기 보여 줍니다. 그림 3 에 노출에 대 한 실험 프로토콜 컬렉션에 대 한 서로 다른 발달 단계에서는 보여 줍니다.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57450/57450fig2.jpg"> 그림 2 : D. melanogaster (가장 일반적으로 사용 되 초파리 모델 시스템)의 라이프 사이클에 대 한 개념적인 개요. Drosophila 라이프 사이클의 단계는: 1) 계란, 2) 첫 번째 탈피 유 충, 유 충 3) 2 차 탈피, 5) 방황 유 충 탈피 3, 4) 제 3-탈피 유 충 6) 동박새과 번데기, 7) 적목 번데기, 8) 새로-eclosed 성인, 및 9) 성숙한 성인. <a href="/files/ftp_upload/57450/57450fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57450/57450fig3.jpg"> 그림 3 : 구두로 보호자 (F0) 후속 세대에 오염된 매체에 초파리 를 노출 하는 방법에 대 한 개념적인 개요 (F1 과 이후). 구두 노출 노출 세대에서 개발 중 (A) 방법. (B) 자손 (F1 을 원하는 세대)에 게 오염 물질의 전송 테스트 방법. 이 그림에서 피터슨 외 수정 되었습니다. 24 <a href="/files/ftp_upload/57450/57450fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<ol><li>
방황-3 탈피 애벌레를 수집
	<ol>
<li>조명 설정, 인큐베이터에서 애벌레 매체에서 등장 하 고 후에 빛 인큐베이터에는 h에서 유리병 측면 위쪽으로 이동 때 튜브를 모니터링 시작 합니다. 이 h 내에서 신중 하 게 나무로 되는 지팡이 또는 핀셋을 사용 하 여 유리병의 측면에서 방황 3 탈피 애벌레를 제거 합니다. 참고: 컬렉션에 사용할 수 있는 애벌레의 수 "2.3.4"에 누워 계란의 수에 따라 달라 집니다.</li>
		<li>애벌레에서 초과 매체를 제거 하려면 dH2오 부 어 dH2O 비 커에서 작은 비 커에 애벌레를 배치 하 고 섬세 한 작업와이 퍼에 애벌레를 놓습니다. 애벌레에서 초과 dH2O를 제거 부드럽게 섬세 한 작업와이 퍼를 사용 하 여.</li>
		<li>환경 제어 인큐베이터에서 실험적인 인구를 유지 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
새로-eclosed 성인 수집
	<ol>
<li>튜브의 측면을 따라 pupae의 채색을 관찰 하 여 일수로 대 한 튜브를 모니터링 합니다. 참고: 개발 중 Pupae 어두워질 것 이다. 개발 시간, 특히 사전 일수로 테스트 종류에 따라 달라 집니다.</li>
		<li>첫 번째 성인 eclose에 시작, 덤프 하 고 광 유를 포함 하는 영안실으로 이러한 성인을 삭제.</li>
		<li>빛을 켤 때 인큐베이터에 다음 아침, 덤프 하 고 삭제할 수 있는 eclosed 하룻밤 또는 morningbefore 빛 중에 알 수 없는 나이 (또는 순 결)의 어른.</li>
		<li>약 4 시간 후, 새로 eclosed 성인 튜브에 CO2 총으로 등장 하는 어른 anesthetize. 해 부 현미경 공동2 접시에 성인을 놓습니다. 섹스 성인 남성과 여성에서 ovipositors의 앞 발에 섹스 빗에 대 한 보고. 참고: D. melanogaster 의 짝짓기 피하려고 일수로 6 h 이내를 수집 해야 합니다 하지만 다른 종 이상 개발 시간을 있을 수 있습니다 (그리고 따라서,이 기간 내 수집 필요 하지 않습니다).</li>
		<li>나무 막대기를 사용 하 여 CO2 접시에 별도 성인. 부드럽게 성인 섹스 관련 그룹 중간 일치 기존의 역사에 나무 막대기를 사용 하 여 전송 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
성숙한 어른 후 일수로 수집
	<ol>
<li>성인 환경 제어 인큐베이터에서 원하는 나이 사후 일수로 하 계란 단계에서 중간 일치 사전 일수로 노출에 남아 있을 수 있습니다.</li>
		<li>성인 성인 그들의 시체에서 초과 오염된 매체를 손질 하는 것을 허용 하도록 테스트 전에 24 h에 대 한 제어 매체 단독으로 전송.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. 후면 대가족제의 효과 또는 Transgenerational 노출 테스트 실험 과목.
<ol><li>후면 부모의 세대 (일명 P0 또는 F0 세대), 전송 성인 주식 인구 제어 및 실험 매체 "2.1" 단계에서 "2.3"와 "3.3" "3.1".</li>
	<li>어른은 재생산으로 성숙 (Pitnick 외를 참조 하십시오. 41), 단독 제어 또는 실험 매체의 신선한 유리병에 남성의 전송 (2.3.1에와 명시) 한 유리병. 단독 지금 남성을 포함 하는 신선한 유리병에 여성의 한 유리병을 전송 합니다. 24-96 h. 덤프에 대 한 친구와 누워 계란 성인 매체에서 허용 광 유를 포함 하는 영안실에 성인을 삭제 하 고 다시 개발 하는 자손 수 있도록 튜브를 품 어.</li>
	<li>4.1 원하는 세대 수에 따라 4.2 통해 단계를 반복 합니다.</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

초파리 melanogaster 유전자와 D. melanogaster 그리고 인간13,14사이 통로의 광범위 한 보존으로 인해 생물 학적 과정의 범위에 대 한 강력한 모델로 설립 되었습니다. 같은 이유로 그것은 의료 과학에 대 한 강력한 모델, 초파리 는 독물학 끝점의 범위에 anthropogenic 오염의 영향을 공부 하기 적합 한 모델 시스템으로 떠오르고 있다. 여러 실험실 성공적으로 사용 하는 D. melanogaster 모델 시스템으로 다양 한 화합물, 중 금속11,,1618-25,<sup class="xref...

매년, 약 1000 새로운 화학 물질 화학 산업1,2;에 의해 소개 된다 그러나, 이러한 화학 물질의 단지 작은 비율의 환경에 미치는 영향 유통2,3전에 테스트 됩니다. 대규모 재해는 일반적인, 오염 물질의 큰 다양 한 sublethal 및 만성 노출은 둘 다 인간과 야생 동물4,5에서 광범위 한. Ecotoxicology 및 환경 독물학의 역사적인 초점 생존6, 에 오염 물질의 영향을 측정 하는 수단으로 치 사 율, 단일 화학 노출, 급성 노출과 노출의 생리 적 효과 테스트 하는 것 이었다 7 , 8 , 9 , 10. 역할 때문에 현재 접근 제한 동물 실험을 윤리적이 고 비-침략 적 접근으로 변화 하지만, 그 개발, 응급 속성 및 외부 요인 (인구 수준 등을 생태계 수준의 상호 작용) 생태학적으로 중요 한 끝점8중재에 재생 합니다. 따라서, 야생 동물 및 실험실에서 척추 동물을 희생 하지 않고 좀 더 전체적인 접근 방식을 통합 하는 방법에 대 한 필요가 있다.
무척 추 동물 모델 시스템, 초파리 melanogaster, 독성 시험에 대 한 좀 더 전체적인 접근에 대 한 필요를 해결 하는 매력적인 대안입니다. D. melanogaster, 전 세기에 대 한 인간 관련 유전자 연구에 대 한 무척 추 동물 모델 시스템으로 원래 개발 되었다11. D. melanogaster 지금 눈에 띄게는 척추 모델 대신 여러 가지 이유로: 1) 유전자와 D. melanogaster 그리고 인간; 사이 통로의 보존 2) 짧은 생성 시간; 척추 모델에 비해 3) 저렴 한 비용, 유지 보수; 4) 큰 샘플 크기; 생성 완화 그리고 5) phenotypic 및 생태학-관련 끝점11,12,13,,1415,16,17 테스트 하기 위해 사용할 수의 과다 .
여러 실험실11,15,16,17,18,19,20,,2122, 23 , 24 , 25 지금 사용 하는 D. melanogaster 척추 모델 대신 독성 테스트에 대 한 오염 인 간에 미치는 영향을 이해 하. 지역 야생 종의 초파리 이용 될 수 있다, 뿐만 아니라, 야생 동물 및 인간 생태학 대답에 대 한 독성 모델-, 행동-, 그리고 조직의 여러 생물 학적 수준에서 진화론 관련 질문. 모델 초파리 속 안에 종을 사용 하 여, 여러 측정 끝점은 가능한11,15,,1618,19,20 ,,2122,23,,2425. In addition, 초파리 모델을 사용 하 여, 독물학 수: 1) 윤리적 조직;의 여러 생물 학적 수준에서 효과 링크 2) 통합 응급 요소와 개발의 역할 연구 3) 생태학적으로 중요 한 끝점 (뿐만 아니라 의학적으로 중요 한 끝점); 4) 동시에; 여러 스트레스 테스트 5) 및 장기 테스트 대가족제 (예: 진화 및 transgenerational) 스트레스의 의미. 따라서, 초파리 모델 시스템으로 사용 하 여 다양을 한 접근, 공부 하는 실험실에 D. melanogaster 의 타고 난된 긴장으로 기계적 접근에 국한 되지 않을 수 있습니다.
이 종이에 우리는 양육 하 고 다양 한 독성에 관한 질문에 대답을 초파리 를 수집 하기 위한 방법을 제시. 좀 더 구체적으로, 우리는 1에 대 한 방법론을 설명) 하나 이상의 오염 물질; 엮 여 매체에 초파리 를 양육 2) 개발 (예: 제 3 탈피 애벌레, 번데기의 경우, 새로 eclosed 성인 그리고 성숙한 어른 방황); 전체 초파리 수집 그리고 3) 장기 toxicant 노출의 진화 의미 뿐만 아니라 테스트 세대간 및 transgenerational 전송, 오염된 매체에 초파리 를 양육. 이 프로토콜, 이전 작가18,19,20,,2122,23,24를 사용 하 여,25 보고 발달의 다른 생리 적, 유전적, 그리고 행동 효과 지도 (Pb2 +) 노출. 이 프로토콜 독물학을 어떻게 오염 물질이 모두 인간 고도 점점 더 오염 된 환경에서 야생 동물에 대 한 위험 요소를 이해 하는 데 필수적 이다 전체 론 독물학 방법을 사용 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>Carolina Biological Instant Drosophila Medium Formula 4-24</td><td>Carolina Biological</td><td>173204</td><td></td></tr><tr><td>Drosophila 바이알, Narrow (PS), 폴리스티렌, Superbulk, 1000 바이알/단위</td><td>Genessee Scientific</td><td>32-116SB</td><td>파리를 보관하는 데 사용</td></tr><tr><td>Flugs 바이알 및 병용 마개, 좁은 플라스틱 바이알</td><td>Genessee Scientific</td><td>49-102</td><td>파리를 보관하는 데 사용</td></tr><tr><td>골판지 트레이, 트레이 좁은,</td><td>좁은 Genessee Scientific</td><td>32-124</td><td>파리의 개체군을 구성하는 데 사용됩니다</td></tr><tr><td>골판지 트레이, 칸막이만, 좁은</td><td>Genessee Scientific</td><td>32-126</td><td>파리의 개체군을 조직하는 데 사용됩니다</td></tr><tr><td>Thermo Scientific&nbsp; Nalgene 스퀘어 와이드 마우스 HDPE 병 클로저</td><td>Fischer Scientific</td><td>03-312D</td><td>오염물 저장에 유용</td></tr><tr><td>Thermo Scientific&nbsp; Nalgene 색상으로 구분된 LDPE 세척 병</td><td>Fischer Scientific</td><td>03-409-17C</td><td>오염물질 저장에 유용</td></tr><tr><td>Eppendorf&nbsp; 리피터 M4 수동 핸드헬드 피펫 디스펜서</td><td>Fischer Scientific</td><td>14-287-150</td><td>매체</td></tr><tr><td>Combitips Advanced Pipetter Tips - Standard, Eppendorf Quality Tips</td><td>Fischer Scientific</td><td>13-683-708</td> 매체 플라이패드 <td>제조에 사용</td></tr><tr><td>, 표준 크기(8.1 X 11.6cm)</td><td>Genessee Scientific</td><td>59-114</td><td>파리 마취에 사용</td></tr><tr><td>Flystuff 풋 밸브</td><td>Genessee Scientific</td><td>59-121</td><td>파리를 마취시키는 데 사용</td></tr><tr><td>튜빙, 녹색 (1 연속 피트/단위)</td><td>Genessee Scientific</td><td>59-124G</td><td>파리를 마취시키는 데 사용</td></tr><tr><td>미네랄 오일, 빛, 흰색, 고순도 등급, 500 mL HDPE 병</td><td>VWR</td><td>97064-130</td><td>시체 안치소를 만드는 데 사용</td></tr><tr><td>유리 삼각 플라스크 세트 - 3가지 크기 - 50, 150 및 250ml, Karter Scientific 214U2</td><td>월마트</td><td>적용되지 않음</td><td>시체 안치소를 만드는 데 사용</td></tr><tr><td>BGSET5 유리 비커 5개 세트</td><td>월마트</td><td></td><td></td></tr><tr><td>근친 또는 야생형 라인 Drosophila</td><td>Bloomington Drosophila 주식 센터 인디</td>애나 대학 <td></td><td>https://bdsc.indiana.edu</td></tr><tr><td>야생 인구 Drosophila</td><td>UC 샌디에이고 Drosophila 재고 센터</td><td></td><td>https://stockcenter.ucsd.edu/info/welcome.php</td></tr></tbody></table>

무척 추 동물 모델 시스템으로 독성 테스트 실험실에서 초파리 를 사용 하 여 실험 프로토콜

Experimental Protocol for Using Drosophila As an Invertebrate Model System for Toxicity Testing in the Laboratory

응급 속성 및 외부 요인 (인구 수준 및 생태계 수준에서에서 상호 작용, 특히) 하지만 그들은 거의 독성 연구에서 고려 생태학적으로 중요 한 끝점, 중재에 중요 한 역할을 재생 합니다. D. melanogaster 이용과, 몇 가지 이름을 행동, 신경, 그리고 유전자에 미치는 영향에 대 한 독성 모델로 떠오르고 있다. 더 중요 한 것은, 속 초파리 에서 응급 속성 및 독성 연구에서 생태학적으로 관련 질문에 응답 하는 통합 프레임 워크 접근을 위한 모델 시스템으로 활용할 수 있습니다. 이 종이의 목적은 phenotypic 출력 및 생태 관련 질문의 범위에 대 한 모델 시스템으로 사용 될 오염 물질을 속 초파리 에서 노출에 대 한 프로토콜을 제공 하는 것입니다. 좀 더 구체적으로,이 프로토콜은 1로 사용할 수 있습니다) 여러 생물학 조직의 수준 연결 및 두 개인 및 인구 수준 피트 니스;에 유독의 영향을 이해 2) 테스트 이용과 발달 노출;의 여러 단계에서의 영향 3) 테스트 대가족제 및 진화 의미 오염 물질; 그리고 4) 동시에 여러 오염 물질과 스트레스 테스트.

구두 노출 함으로써 초파리 개발을 통해 contaminant(s)에, 다양 한 독성에 관한 질문은 생물 학적 조직의 서로 다른 수준에서 초파리 를 노출 하 여 테스트할 수 있습니다. 이 섹션에서는 이전에 게시 논문23,24에서이 프로토콜을 사용 하 여 얻은 대표적인 결과 합니다. 특히,이 프로토콜은 이전 축적, 제거 및 노출의 같은 세대 자손23; 1 세대에 걸쳐 내 납 (Pb)의 격리 사용 그리고 메이 트 선택24에 축적의 의미를 공부 합니다.
표 1 과 그림 4</stron...

이 종이 다른 발달 단계에서 phenotypic 출력의 범위에 노출의 영향을 공부 하 고의 목표를 가진 오염 물질을 속 초파리 에서 종 노출 및 이상 한 세대에 대 한 상세한 프로토콜을 제공 합니다.

Emergent properties and external factors (population-level and ecosystem-level interactions, in particular) play important roles in mediating ...

이 프로토콜은 다양한 발달 단계에서 독성 물질이 피트니스에 미치는 영향을 이해하고 세대에 걸쳐 오염 물질에 대한 노출의 영향을 조사하는 데 사용할 수 있습니다. 제 연구실에서 콜로라도 주립 대학교 푸에블로(Colorado State University Pueblo)의 적극적인 줄기 참여를 구축하는 커뮤니티의 일부인 두 명의 학부생인 휴 롱(Hugh Long)과 타일러 하비(Tyler Harvey)가 절차를 시연할 것입니다. 관심 있는 환경 오염 물질로 작업을 시작하려면 먼저 화합물 초혈증의 치사량 50%를 결정하십시오.확립된 방법을 사용하여 용량 반응 곡선을 만듭니다. 다음으로, 원하는 농도의 화합물로 성장 배지를 준비합니다. 예를 들어, 인스턴트 매체를 만들 때 물 분취액에 화합물을 첨가하십시오.병행하여, 첨가된 화합물 없이 대조 매체를 만드십시오. 실험 동물을 채집할 배양을 설정하려면 표준 방법을 사용하여 생식 성체를 성장 배지로 옮깁니다. 바이알당 파리의 수를 표준화하고 성충이 과도하게 밀집되지 않도록 합니다.그런 다음 표준 조건에서 1-4일 동안 파리를 배양합니다. 부화 후에는 성체를 버리고 수정을 한 난자를 남겨두고 테스트를 위해 성숙시킵니다. 그런 다음 바이알을 인큐베이터에 다시 넣습니다.노출은 모든 발달 단계에서 설정할 수 있습니다. 또한 실험 목표에 따라 모든 발달 단계에서 실험 대상을 수집할 수 있습니다. 매일 발달 중인 동물을 확인하여 방황하는 세 번째 instar 유충과 같은 관심 단계의 첫 번째 징후를 식별합니다.방황하는 세 번째 instar 유충 단계에 대한 노출의 영향을 테스트하려면 불을 켠 후 한 시간 이내에 유충이 먹이 기질에서 나오기 시작할 때 유충을 수집하십시오. 다음으로 물을 붓고 유충을 실험실 티슈로 옮겨 여분의 물을 부드럽게 제거합니다. 건조되면 유충을 적절한 튜브로 옮겨 수집합니다.성인에 대한 노출의 영향을 테스트하려면 새로 폐쇄된 성인을 수집합니다. 이산화탄소 마취는 괜찮습니다. 파리가 생식적으로 성숙하고 짝짓기를 시작하기 전에 파리를 모으는 것을 잊지 마십시오. 파리를 성별에 따른 그룹으로 나누고 기존 노출과 일치하도록 대조군 또는 실험적으로 오염된 배지가 적재된 바이알로 옮깁니다.나중에, 성충 파리의 오염 물질을 측정하기 24시간 전에 대조 배지와 오염된 배지에 있는 성인을 대조 배지가 장전된 바이알로 옮겨 성인이 몸에서 과도한 배지를 손질할 수 있도록 합니다. 24시간 동안 털을 손질한 후 적절한 방법을 사용하여 파리를 테스트할 수 있습니다. 예를 들어, 짝짓기 선택 분석을 사용하여 행동 변화를 테스트할 수 있습니다.이러한 방법을 사용하면 오염 물질 노출의 세대 간 영향에 대한 연구가 매우 쉽습니다. 통제 매체에 노출된 성체 사이에 교배를 설정하고 Fnot 노출이 자손에 미치는 영향을 연구하기만 하면 됩니다. 이 프로토콜은 동일한 세대의 자손 내에서 납의 축적, 제거 및 격리를 평가하는 데 사용되었습니다.초파리는 다양한 용량, 발달 단계 및 진화 규모에서 납을 쉽게 축적했습니다. 여러 세대에 걸친 노출을 사용하여 부모의 노출이 성인 자손의 1세대에게 전달되지 않는 것으로 밝혀졌습니다. 따라서 이 프로토콜을 사용하면 다양한 진화 규모에서 적응 반응과 세대 간 효과 Fnot 노출을 테스트할 수 있습니다.다음으로, 파리를 대조군 또는 납 배지에서 알 단계에서 성체로 사육하고 정화 24시간 후 짝 선호도를 테스트했습니다. 암컷은 납이 함유된 매체에서 자랐으며, 대조군에 노출된 수컷보다 납에 노출된 수컷과 우선적으로 짝짓기를 했습니다. 반면에, 남성은 동일한 편견을 보이지 않았다.이 동영상을 시청한 후에는 다양한 질문과 독성학에 답하기 위해 초파리를 사육하고 수집하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 일단 마스터하면 이 프로토콜이 제대로 수행되면 1-2개월 안에 완료할 수 있습니다. 이 절차를 시도하는 동안 불필요한 스트레스를 유발하지 않도록 파리를 부드럽게 다루는 것을 기억하는 것이 중요합니다.이 절차에 따라 행동, 유전 및 신경학적 질문과 같은 다른 질문을 테스트할 수 있습니다. 오염 물질로 작업하는 것은 매우 위험할 수 있으며 이 절차를 수행하는 동안 개인 보호 장비를 착용하고 후드에 오염 물질을 준비하는 것과 같은 예방 조치를 항상 취해야 한다는 것을 잊지 마십시오.

experimental-protocol-for-using-drosophila-as-an-invertebrate-model

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

과학자들은 초파리 수명 프로토콜을 사용하여 다양한 실험 조건이 파리의 수명에 어떤 영향을 미치는지 측정하고 그 과정에서 생존 곡선을 생성하여 실험 결과를 정량화합니다. 샘플 프로토콜은 17-α-에티닐에스트라디올(EE2)과 같은 다양한 농도의 내분비 교란 물질 화학 물질(EDC)에 대한 노출이 수명에 미치는 영향을 연구하기 위해 적용되는 분석을 특징으로 합니다.

Drosophila melanogaster의 수명 프로토콜: 파리 수명의 차이를 식별하기 위한 생존 곡선 생성

이 비디오는 착색된 사료를 사용하여 먹이를 모니터링하고 첨가된 화합물이 먹이 활동에 미칠 수 있는 영향을 모니터링하는 초파리에 대한 먹이 분석을 설명합니다. 예시 프로토콜은 여러 내분비 교란 화학물질(EDC)의 효과를 테스트합니다.

수유 테스트: Drosophila melanogaster의 수유 선호도 평가

여기에서는 스트레스를 받는 개인의 회피를 정량화하는 프로토콜을 제시합니다. 이 패러다임은 강력하면서도 사용자 친화적이며 Drosophila melanogaster의 한 종류의 사회적 상호 작용에 대한 유전자와 환경의 영향을 평가하는 데 사용할 수 있습니다.

사회 회피의 정량화에 대한 간단한 분석 초파리

여기, 우리로 초파리 감각 신경- vivo에서 결합 하는 수지상 arborization (다) 신경 부상 모델, 라이브 영상, 2 광자 레이저 axotomy/dendriotomy, 그리고 강력한 비행 유전 도구 상자, 를 사용 하 여 프로토콜을 제시 잠재적인 발기인 및 neuroregeneration의 억제제 상영을 위한 플랫폼.

주변에 Neuroregeneration 중앙 신 경계를 연구 하 고 대 한 Vivo에서 초파리 부상 모델

이 프로토콜 비용 효율적이 고 편리한 약리학 대리인, 신경 단백질의 유전자 돌연변이의 테스트를 가능 하 게 초파리 melanogaster 중앙 신경 시스템의 하강 전기 활동을 기록 하는 방법을 설명 합니다. 또는 미개척된 생리 적인 통로의 역할입니다.

제 3-탈피 초파리 Melanogaster 의 중앙 신 경계 활동의 electrophysiological 녹음

내분비 파괴 물질 (EDC)은 유기체와 자연 환경에 심각한 문제를 나타냅니다. 드로소필라 멜라노가스터는 생체 내에서 EDC 효과를 연구하는 이상적인 모델을 나타낸다. 여기에서, 우리는 Drosophila에 있는 내분비 중단을 조사하는 방법을 제시합니다, fecundity에 EDC 효력을, 비옥, 발달 타이밍 및 비행의 수명을 해결하.

초파리 멜라노가스터에서 내분비 장애를 테스트하는 방법

이 프로토콜은 액체 배지를 사용하여 성인 Drosophila melanogaster의 생존 가능성에 대한 화학 독성 물질의 영향을 평가하는 효율적이고 저렴한 방법을 설명합니다.

성인 Drosophila Melanogaster의 화학적 독성 평가

이 프로토콜은 전통적인 포유류 모델에 대한 대안으로 운동 기능 장애의 정량화를 통해 초파리의 신경 독성을 평가하기 위한 고처리량, 비용 효율적인 방법을 제시합니다. 민감하고 재현 가능하며 윤리적으로 유리한 모델을 사용하여 제약 화합물, 환경 제제 또는 유전자 변형의 신경독성 영향을 평가하는 것을 목표로 합니다.

신경독성에 대한 판독으로서의 Drosophila melanogaster 의 운동 기능 장애에 대한 행동 분석

이 비디오와 분석이 보여주는 것을 테스트하지 않는 분야와 하나의 담배 공장을 감염 시켰어 aphids 하나의 두 가지 유형으로 니코틴의 내성.

인공 다이어트 실험을 사용하여 Aphids에 니코틴 공차 테스트

이 연구, 화학 물질, 산업 폐수 또는 하수 및 해수 갑각류에 액상 환경 시료에 의해 진력 장기 (14 일) 치명적인 독성을 결정하는 중요한 방법론 프로토콜의 개발 및 표준화에...

갑각류와 장기 치명적인 독성 시험 Artemia franciscana</em

학습하세요 Drosophila를 활용한 환경독성물질 노출 프로토콜로 다양한 발달단계와 세대에 걸친 적응도 영향을 평가하는 방법입니다. 이 기법은 생태학적 및 건강 위험 평가 연구에 활용됩니다.

무척 추 동물 모델 시스템으로 독성 테스트 실험실에서 초파리 를 사용 하 여 실험 프로토콜

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