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Digestión de proteínas, ultrafiltración y cromatografía por exclusión de tamaño para optimizar el aislamiento de exosomas de suero y Plasma de sangre humana
JoVE 신문
생화학
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JoVE 신문 생화학
Protein Digestion, Ultrafiltration, and Size Exclusion Chromatography to Optimize the Isolation of Exosomes from Human Blood Plasma and Serum
DOI:

09:22 min

April 13, 2018

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Chapters

  • 00:04Title
  • 01:06Preparation of Crude Sample (Either Plasma or Serum) by Pelleting Larger Vesicles and Cellular Debris
  • 02:04Digestion of Non-exosomal Blood Proteins and Removal of Small Proteins/Peptides by Centrifuge Ultrafiltration
  • 04:21Purification of Vesicles by Size Exclusion Chromatography (SEC)
  • 05:45Concentration of Purified Exosomes/Total Protein Quantification and Quantification/Sizing of Exosomes by Nanoparticle Tracking Analysis (NTA)
  • 07:09Results: Increased Vesicle Yield and Exosome-specific Markers After Purification
  • 08:15Conclusion

Summary

자동 번역

Aquí, presentamos un protocolo para purificar exosomas de plasma y suero con menor Co purificación de proteínas de la sangre no exosomal. El protocolo optimizado incluye tratamiento con proteasas y ultrafiltración y cromatografía por exclusión de tamaño. Mayor purificación de exosomas beneficios aguas abajo los análisis, incluyendo la cuantificación más exacta de las vesículas y caracterización proteómica.

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