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Tischplatte immobilisiert Metall Affinitätschromatographie, Rekonstitution und Assay ein Polyhistidine getaggt Metalloenzyme für das Grundstudium Labor
JoVE 신문
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JoVE 신문 생화학
Benchtop Immobilized Metal Affinity Chromatography, Reconstitution and Assay of a Polyhistidine Tagged Metalloenzyme for the Undergraduate Laboratory
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Tischplatte immobilisiert Metall Affinitätschromatographie, Rekonstitution und Assay ein Polyhistidine getaggt Metalloenzyme für das Grundstudium Labor

DOI:
10.3791/58012-v

•

08:02 min

•

August 23, 2018

•

,
1Department of Chemistry,Muhlenberg College

Chapters

  • 00:04Title
  • 00:34Preparation of the IMAC Column
  • 01:42Purification of Polyhistidine-tagged Target by IMAC
  • 04:32Reconstitution of Target Protein with Fe2+
  • 06:43Results: Undergraduate Performed Assay of a Polyhistidine Tagged Metalloenzyme
  • 07:28Conclusion

Summary

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Hier präsentieren wir ein Protokoll zur Tischplatte immobilisiert Metall Affinität Chromatographie Reinigung und anschließende Wiederherstellung der ein Polyhistidine markiert, nicht-Häm-Eisen bindende Dioxygenase für grundständige Lehre Labor geeignet.

Tags

Keywords: Benchtop Immobilized Metal Affinity ChromatographyPolyhistidine Tagged MetalloenzymeUndergraduate LaboratoryNon-heme Iron-binding EnzymesNickel-bound Nitriloacetic Acid ResinLysis Bind BufferCell-free Crude ExtractsFlow-throughEluent

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