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Estrazione di caffeina, l'attività enzimatica e l'espressione genica della sintasi di caffeina da sospensioni di cellule vegetali
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Caffeine Extraction, Enzymatic Activity and Gene Expression of Caffeine Synthase from Plant Cell Suspensions
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Estrazione di caffeina, l'attività enzimatica e l'espressione genica della sintasi di caffeina da sospensioni di cellule vegetali

DOI:
10.3791/58166-v

•

09:11 min

•

October 02, 2018

•

, , , , ,
1Unidad de Bioquímica y Biología Molecular de Plantas,Centro de Investigación Científica de Yucatán, 2CONACYT, Facultad de Ingeniería Química, Campus de Ciencias Exactas e Ingeniería,Universidad Autónoma de Yucatán

Chapters

  • 00:04Title
  • 00:28Caffeine Extraction in Cell Suspension of C. arabica L.
  • 00:55Conditions for the Assessment of Caffeine by Thin Layer Chromatography (TLC) Denistometry
  • 01:29Ribonucleic Acid (RNA) Isolation
  • 02:55Incubation of RNA Transcript with Deoxyribonuclease (DNase)
  • 03:59Complementary Deoxyribonucleic Acid (cDNA) Synthesis
  • 05:03Real-Time Quantitative PCR (qPCR) to Amplify the Gene CCS1
  • 05:43Total Protein of Cell Suspensions of C. arabica L.
  • 06:26Enzymatic Assay for Caffeine Synthase
  • 07:39Results: Enzymatic Activity of Caffeine Synthase Gene Evaluated via qPCR
  • 08:30Conclusion

Summary

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Questo protocollo descrive una metodologia efficace per l'estrazione e la quantificazione di caffeina in sospensioni cellulari di L. c. arabica e un processo sperimentale per valutare l'attività enzimatica della sintasi di caffeina con il livello di espressione il gene che codifica per questo enzima.

Tags

Keywords: Caffeine ExtractionEnzymatic ActivityGene ExpressionCaffeine SynthasePlant Cell SuspensionsAnalytical Chemistry생화학BiotechnologyCaffeine BiosynthesisIn Vitro Plant ModelsAcetoneTLCDensitometryRNA IsolationChloroform Isoamyl AlcoholPhenolIsopropanolEthanolDEPC-treated WaterDNase

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