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Como quantificar a fração de proteínas fluorescentes fotoativo a granel e em células vivas
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JoVE 신문 생화학
How to Quantify the Fraction of Photoactivated Fluorescent Proteins in Bulk and in Live Cells

Como quantificar a fração de proteínas fluorescentes fotoativo a granel e em células vivas

DOI:
10.3791/58588-v

•

11:03 min

•

January 07, 2019

•

,
1Gynecologic Oncology Division,Stanford University School of Medicine

Chapters

  • 00:04Title
  • 01:20Cell Culture and Transfection
  • 02:31Imaging and Photoactivation
  • 05:45Imaging Analysis and Algorithm for Ratiometric Intensity-based Quantification of Photoactivation Efficiency
  • 09:09Results: Maximizing Photoactivation Efficiency
  • 09:50Conclusion

Summary

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Aqui, apresentamos um protocolo que envolve photoactivatable espectralmente distinto geneticamente acoplado e proteínas fluorescentes. Estas quimeras de proteína fluorescente permitam a quantificação da fração de PA-FP que é fotoativo ser fluorescente, ou seja, a eficiência de fotoativação. O protocolo revela que diferentes modos de fotoativação produzem photoactivation diferentes eficiências.

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Keywords: Photo-activatable Fluorescent ProteinsPA-GFPPA-CherryFluorescence MicroscopyProtein ExpressionQuantificationLive CellsInternal RulersGenetically Coupled Fluorescent Proteins

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