Técnicas de biopsia de glándula mamaria bovina

Una biopsia, como creo que la mayoría de ustedes saben, es la extracción de un poco de tejido del órgano de interés y en este caso, es la glándula mamaria. La muestra de biopsia es muy útil si vas a hacer cosas como el análisis de expresión génica, si vas a hacer cosas como tomar parte del tejido y hacer un análisis histológico, para mirar la estructura a nivel microscópico de la glándula mamaria, también muy útil para determinar cosas como señalar vías relacionadas con la acción hormonal, por ejemplo, , por lo que una de las precauciones que debe tener en cuenta cuando usted hace cualquier tipo de muestreo de tejido mamario, es que ha tomado una muestra que es verdaderamente representativa? Porque, usted puede capturar un lóbulo, que sería como un racimo de uvas, o puede capturar algunos alvéolos individuales que realmente no representan lo normal, así que, la esperanza que tiene cuando hace su biopsia mamaria es que usted está recolectando tejido parénquima, que es sólo una palabra elegante para decir el tejido funcional responsable de la producción de leche , una muestra representativa.

La mayoría de las terminaciones nerviosas sensoriales en la glándula mamaria están asociadas con la piel, por lo que es importante darse cuenta y apreciar que, una vez que haya hecho la preparación adecuada de la zona donde va a hacer la incisión inicial, para anestesiar la piel, entonces hay muy poco en el camino de cualquier terminación de los nervios sensoriales asociadas con el tejido parénquima en sí , y por lo tanto, la incomodidad que el animal sentiría se asocia principalmente con la piel. Por lo tanto, hay una variedad de cosas que se pueden hacer con este tejido, y en realidad permite recopilar más información sobre cómo funciona ese animal, en comparación con lo que podría obtenerse simplemente observando lo que se alimentó al animal y las respuestas en la producción de proteína de leche o la producción de componentes de leche. Todos los métodos descritos fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de Virginia Tech.

Un día antes de la biopsia programada, lave y frote al animal, particularmente, la ubre, para eliminar el estiércol y el material sucio. Evaluar la salud, condición física y comportamiento del animal. Use sólo vacas sanas.

Ordeña completamente la vaca. Mueva al animal al conducto de compresión, idealmente dentro de las dos horas de ordeño para minimizar la presencia de leche en las glándulas. Sujeta al animal con una puerta.

Coloque un halter de cuerda en la cabeza de la vaca para evitar el movimiento hacia atrás y hacia adelante. Tire de la cabeza del animal hacia un lado y ate la cuerda al conducto de apriete usando un nudo de liberación rápida para mantener la cabeza en su lugar. Limpie el área de inyección con un hisopo de alcohol isopropílico al 70% y administre flunixin meglumina 1,1 a 2,2 miligramos por kilogramo de peso corporal por vía intravenosa, a través de la vena yugular, 15 a 20 minutos antes de la biopsia.

Localice la vena yugular. Elevar la vena yugular mediante la aplicación de presión en la base de la ranura yugular. Compruebe que no haya burbujas en la jeringa.

Inserte la aguja en la vena yugular elevada y extraiga 0,5 mililitros de sangre en la jeringa dos veces y mezcle con el contenido. Si no aparece sangre en la jeringa, reubique la aguja. Si la aguja reside en la vena, inyecte el contenido.

Retire suavemente la aguja, aplique gasa con una presión suave en el lugar de inyección para evitar el sangrado. Administrar clorhidrato de xilazina por vía intravenosa, 0,01 a 0,05 miligramos por kilogramo de peso corporal en el recipiente cocilgeal aproximadamente cinco a 10 minutos antes de la biopsia para permitir tiempo suficiente para el establecimiento de la sedación. Levante la cola y limpie el área de la inyección con un hisopo de alcohol isopropílico al 70%.

Compruebe que no haya burbujas en la jeringa. Inserte la aguja en el vaso de cola, extraiga 0,2 mililitros de sangre en la jeringa y mezcle con el contenido para asegurarse de que la aguja reside en el vaso. Si la aguja es residente, inyecte el contenido de la jeringa.

Retire suavemente la aguja. Aplique gasa con una presión suave en el lugar de inyección. Es muy importante tener una reversión alfa de dos a la mano, como la tolazolina, esto se debe a que las vacas lecheras son sensibles a los efectos de la xilazina, y una sobredosis de xilazina puede causar edema pulmonar, que potencialmente podría ser fatal para la vaca lechera, así que vigile a su vaca en busca de signos de sobresellado y si se producen, entonces se puede dar la cantidad adecuada de tolazolina.

Queremos que nuestras vacas estén de pie durante un procedimiento. Demasiada xilazina puede hacer que se sienten. Pida a un asistente que ate la cola para el procedimiento, seleccione el sitio de la biopsia en la ubre, normalmente en una zona superior para minimizar la acumulación de tejido conectivo y evitar la penetración en la cisterna de la glándula.

Observar y palpar la piel con especial atención para identificar cualquier vaso sanguíneo subcutáneo grande con el fin de evitar estos vasos durante la biopsia. Recortar el cabello de un área de 15 por 15 centímetros cuadrados alrededor del sitio de la biopsia, preparar el área de la biopsia con un povidona-yodo, 0.75 por ciento de yodo disponible, o exfoliación de gluconato de clorhexidina. Alternar el 70%alcohol isopropílico al menos tres veces para eliminar todos los desechos visibles e invisibles.

Aplicar la solución de exfoliación aséptica y el alcohol isopropílico en un movimiento circular, utilizando un enfoque de adentro hacia afuera. Asegúrese de que la solución antiséptica permanece en contacto con la piel durante al menos cinco minutos. Utilice un conjunto de infusión de mariposa con una aguja de 18 G para depositar seis mililitros de clorhidrato de lidocaína por ciento por vía subcutánea en el sitio de la incisión para crear un bloque de línea.

No penetre en los tejidos más profundos. Deje que el anestésico local se difunda durante tres a cinco minutos, realice otra repetición de la solución de exfoliación y alcohol antes de la incisión. Mientras espera, prepare los instrumentos de biopsia.

Lo que quieres hacer en términos de proporcionar analgesia es desensibilizar la piel. Eso es porque tenemos más inervación neuronal en la piel y los tejidos subcutáneos, y en el parénquima, realmente sólo estamos hablando de receptores elásticos, y estos no sienten dolor quirúrgico igual que la piel y los tejidos subcutáneos. De hecho, si terminas poniendo anestesia local en el parénquima, puedes aumentar el riesgo de sangrado durante el procedimiento.

Utilice técnicas asépticas al manipular las herramientas de la biopsia y para la incisión. Lávese las manos para eliminar toda la contaminación visible y aplique guantes quirúrgicos estériles. Organizar los instrumentos quirúrgicos en un área estéril en orden de uso.

Tener un bisturí número 10, gasa estéril, y ensamblar el instrumento de biopsia y una toalla estéril para la homeostasis. Procedimiento uno, instrumento de biopsia de núcleo. Montar el instrumento de biopsia de núcleo utilizando guantes quirúrgicos.

Coloque las siete piezas estériles en una cortina estéril. Inserte la cuchilla en el sistema de acoplamiento en la pieza dos. Inserte la pieza tres encima de la pieza dos, asegurando que la estación de acoplamiento se alinee.

Enganche el borde final de la hoja en el sistema de acoplamiento de la pieza cuatro. Empuje hacia adelante la pieza cuatro y observe si la pieza cuatro está al lado de la pieza tres. Inserte la pieza cinco en el dispositivo.

Asegúrese de que la estación de acoplamiento esté alineada. Inserte la pieza seis en la parte superior de la pieza dos. Asegúrese de que la estación de acoplamiento esté alineada.

Inserte el tornillo de bloqueo en la estación de acoplamiento. Empuje hacia adelante la pieza tres para cubrir el tornillo de bloqueo. Active la herramienta, empujando hacia adelante la pieza cuatro y observe la hoja fuera de la herramienta.

Tire de la pieza cuatro hacia atrás para retraer la hoja en la herramienta. Asegúrese de que la vaca esté lo suficientemente sedada y que el sitio de la biopsia esté lo suficientemente anestesiado, pellizca la piel para asegurar que no se reaccione. Haga una incisión vertical de dos a tres centímetros a través de la piel y los tejidos subcutáneos de proximal a distal usando un bisturí número 10.

Conecte el instrumento de biopsia a un taladro inalámbrico utilizando técnicas estériles. Coloque el taladro contra la herramienta de biopsia y compruebe si la herramienta está firmemente unida a la broca. Asegurar una sujeción adecuada haciendo que un individuo eleve la cola durante todos los procedimientos.

Encienda el taladro usando la rotación en el sentido de las agujas del reloj y una velocidad baja. Avance toda la herramienta de biopsia alrededor de 7,5 centímetros en la ubre a través de la incisión mientras la herramienta está girando. Apague el taladro y extienda manualmente la pieza cuatro de la herramienta, encienda el taladro usando la rotación en el sentido de las agujas del reloj y una velocidad baja, retire el instrumento que contiene el núcleo del tejido de la ubre.

Aplique una presión fuerte inmediatamente sobre la herida con una toalla estéril durante al menos 20 minutos. Inserte la cánula en el tejido. Empuje la pieza hacia adelante para activar la herramienta.

Gire en una rotación lenta en el sentido de las agujas del reloj. La muestra de tejido está ahora dentro de la cánula. Retire el tejido de la herramienta de biopsia usando pinzas.

Mantener la muestra en una solución salina tamponada de fosfato X y evaluar la cantidad de tejido. Tome los signos vitales de la vaca cada 10 minutos después de la biopsia durante al menos 30 minutos. Compruebe si hay sangrado después de 20 minutos de presión en el sitio de la biopsia.

Si hay goteos de sangre, continúe aplicando presión durante cinco a 10 minutos adicionales. Cierre las incisiones con grapas de acero inoxidable a intervalos de cinco milímetros después de que todo el sangrado se haya detenido. Aplique un vendaje en aerosol en el área de la biopsia.

Observar al animal durante 50 minutos después del procedimiento. Procedimiento dos, instrumento de biopsia de aguja. Siga las instrucciones del fabricante para el dispositivo.

Retire la aguja de la biopsia del paquete utilizando técnicas estériles. Deseche la aguja si se observa algún daño. Coloque la aguja en el dispositivo.

Cierre la cubierta y córte el dispositivo. Asegúrese de que la vaca esté lo suficientemente sedada y que el sitio de la biopsia esté lo suficientemente anestesiado, pellizca la piel para asegurar que no se reaccione. Haga una incisión vertical de uno a dos centímetros a través de la piel y los tejidos subcutáneos de proximal a distal usando un bisturí número 10.

Inserte la aguja de la biopsia en el sitio de la incisión, alrededor de 10 a 13 centímetros de la piel. Active el dispositivo de aguja de biopsia para recoger el tejido. Retire la aguja de la ubre.

Aplique presión fuerte inmediata sobre la herida con una toalla estéril durante al menos 20 minutos. Después de extraer el tejido de la aguja, siga el procedimiento descrito anteriormente para cerrar la incisión. Todo el procedimiento tarda unos 45 minutos en terminar, por animal.

Los coágulos de sangre deben ser sacados del cuarto biopsiado. Además, es necesario observar el rendimiento de la leche y la ingesta de alimentos, si es posible. Asegurar siempre la salud y el bienestar del animal antes, durante y después del procedimiento.

Documentar todos los medicamentos administrados a los animales. Compruebe la presencia de sangre en la leche durante siete a 10 días después de la biopsia. Se descuartizarn la sangre de la parte de la biopsia en ordeños posteriores y asegurarse de que se produce la eliminación completa de la leche.

Observe el rendimiento de la leche y, si es posible, la ingesta diaria de alimento individual hasta que se hayan extraído las grapas quirúrgicas. Monitoree al animal dos veces al día para la temperatura corporal, la respiración y las frecuencias cardíacas, y la actitud, hasta que se hayan extraído los alimentos básicos quirúrgicos. Revise el sitio de la biopsia dos veces al día en busca de hinchazón, sensibilidad y cualquier signo de drenaje hasta que se hayan extraído las grapas quirúrgicas.

Si se observan, consulte a un veterinario. Retire las grapas del sitio de la incisión de 10 a 14 días después de la biopsia, dependiendo de la tasa de curación. Consulte a un veterinario si se observa algún signo de infección local o sistémica.

Por lo tanto, tan pronto como se toma la biopsia, has interrumpido la sangre y, por lo tanto, el suministro de nutrientes y oxígeno a ese tejido, por lo que si no eres muy rápido para extraer ese núcleo tisular, y de alguna manera detener la actividad tisular, las concentraciones que podrías medir en un momento posterior en el laboratorio pueden no ser realmente reflejadas de lo que estaba sucediendo en ese animal en el momento de la biopsia. Típicamente, eliminaríamos rápidamente el tejido y lo congelaríamos en nitrógeno líquido para tratar de preservar esa actividad. La otra cosa que uno puede hacer con ese tejido, y esto es en realidad algo que hicimos con el tejido que recogimos, fue que uno puede aislar y crecer las células que están presentes en ese tejido en un sistema de cultivo.

En nuestro caso, estamos interesados en las células epiteliales que están dentro de ese tejido, porque esas son las células que realmente sintetizan y secretan los componentes de la leche, y así, esas células de esas piezas de tejido fueron colocadas en cultivo, y en realidad, todavía están creciendo hoy en día. Los animales se observaron dos veces al día durante 10 días después del procedimiento. No se produjeron complicaciones durante el procedimiento o en el período postoperatorio, con parámetros vitales de las vacas que permanecen dentro de los límites normales.

Los modelos lineales muestran que 10 días antes de la biopsia, los animales producían 23,35 kilogramos de leche por día. Los animales no mostraron cambios significativos en el rendimiento de la leche de 10 días antes a 10 días después de la biopsia. La biopsia de la glándula mamaria bovina es un procedimiento mínimamente invasivo, lo que permite al animal tener un corto tiempo de recuperación.

Por lo tanto, este procedimiento de biopsia se puede utilizar en muchos ensayos de nutrición y otros tipos de ensayos donde podríamos utilizar medidas repetidas en los animales, por lo que, por ejemplo, si tenemos cuatro períodos con cuatro tratamientos nutricionales diferentes, podríamos biopsiar fácilmente estas vacas cuatro veces diferentes al final de cada período, permitiendo tal vez una semana de tiempo de descanso entre cada período , para garantizar que los animales vuelvan a su producción normal.