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如何稳定蛋白质: 病毒 x 项目中热移检测和纳米差动扫描荧光测量的稳定性筛选

JoVE 신문
생화학

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JoVE 신문 생화학

How to Stabilize Protein: Stability Screens for Thermal Shift Assays and Nano Differential Scanning Fluorimetry in the Virus-X Project

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如何稳定蛋白质: 病毒 x 项目中热移检测和纳米差动扫描荧光测量的稳定性筛选

DOI:

10.3791/58666-v

•

07:22 min

•

February 11, 2019

•

Daniel Bruce, Emily Cardew, Stefanie Freitag-Pohl, Ehmke Pohl²

¹Department of Biosciences,Durham University, ²Department of Chemistry,Durham University

Chapters

00:04Title
00:27Preparation of Protein Sample
01:31Performing a Thermal Shift Assay (TSA) Experiment
03:22Preparing and Programing a Nano Differential Scanning Fluorimetry (nanoDSF) Experiment
05:35Results: Analysis of the Temperature at the Inflection Point of the Unfolding Transition (T_m) in Lysozyme
06:55Conclusion

Summary

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提出了一种通过热移分析和纳米差动扫描荧光法快速测试蛋白质在各种条件下的热稳定性的方案。缓冲系统、盐和添加剂, 包括三个独特的稳定屏幕, 与蛋白质一起进行检测, 以确定适合功能和结构研究的缓冲液。

Tags

Keywords: Protein Stabilization Thermal Shift Assay Nano Differential Scanning Fluorimetry Protein Chemistry Drug Discovery Stability Screen Protein Thermostability Protein Ligand Binding High-throughput SYPRO Orange Dye RT-PCR System Melt Curve Analysis

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