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Solo paso purificación de complejos macromoleculares utilizando RNA unido a biotina y un enlazador foto escindibles
JoVE 신문
생화학
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JoVE 신문 생화학
Single-step Purification of Macromolecular Complexes Using RNA Attached to Biotin and a Photo-cleavable Linker
DOI:

08:12 min

January 03, 2019

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Chapters

  • 00:04Title
  • 00:51Substrate Preparation
  • 01:28Complex Assembly
  • 02:14Immobilization of the RNA/protein Complexes on Streptavidin Beads
  • 04:00UV-Elution
  • 05:08Sample Analysis by Silver Staining Followed by Mass Spectrometry
  • 05:59Results: Analysis of UV-eluted Complexes
  • 07:36Conclusion

Summary

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Complejos de ARN/proteína purificados mediante estrategia de botín-estreptavidina se eluyen a solución bajo condiciones de desnaturalización en una forma inadecuada para la posterior purificación y análisis funcional. Aquí, describimos una modificación de esta estrategia que utiliza a un enlazador foto escindibles en RNA y un suave paso UV-elución, produciendo complejos de RNA/proteína nativas y completamente funcionales.

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