Expression and Purification of the Human Lipid-sensitive Cation Channel TRPC3 for Structural Determination by Single-particle Cryo-electron Microscopy

Emery Haley; Wooyoung Choi; Chen Fan; Weinan Sun; Juan Du; Wei L&#252;

doi:10.3791/58754

Journal

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생화학

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식 및 단일 입자 Cryo 전자 현미경 검사 법에 의하여 구조 결심에 대 한 인간의 지질 민감한 양이온 채널 TRPC3의 정화

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Expression and Purification of the Human Lipid-sensitive Cation Channel TRPC3 for Structural Determination by Single-particle Cryo-electron Microscopy

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식 및 단일 입자 Cryo 전자 현미경 검사 법에 의하여 구조 결심에 대 한 인간의 지질 민감한 양이온 채널 TRPC3의 정화

DOI:

10.3791/58754-v

•

08:27 min

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January 07, 2019

•

Emery Haley*¹, Wooyoung Choi*¹, Chen Fan, Weinan Sun³, Juan Du, Wei Lü

¹Van Andel Institute, ²Vollum Institute, ³Janelia Research Campus

Chapters

00:04Title
00:34Infection of HEK293 Mammalian Cells with P2 Baculovirus for Large-scale Protein Expression
02:42Purification of hTRPC3 Protein from the Frozen Cell Pellet
05:26Results: Structural Determination of hTRPC3
07:36Conclusion

Summary

자동 번역

이 프로토콜 cryo 전자 현미경 검사 법, 효율적으로 최소한의 노력 및 독성, 단백질 추출, 정화, 포유류 세포에 있는 유전자를 표현 하는 데 사용 되는 잠재 시스템을 포함 하 여 이온 채널 구조를 결정 하는 데 사용 하는 기법을 설명 합니다. 그리고 품질 검사, 샘플 그리드 준비 및 심사, 뿐만 아니라 데이터 수집 및 처리.