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Uso delle proteine di fusione ricombinante in una piattaforma di analisi fluorescente proteasi e loro rinaturalizzazione In-gel
JoVE 신문
생화학
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JoVE 신문 생화학
Use of Recombinant Fusion Proteins in a Fluorescent Protease Assay Platform and Their In-gel Renaturation
DOI:

19:23 min

January 16, 2019

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Chapters

  • 00:00Title
  • 01:05Generation of the Substrate-coding Expression Plasmids
  • 02:16Expression of the Fluorescent Substrates
  • 03:35Cell Disruption
  • 04:26Ni-NTA Magnetic Agarose Bead-based Protease Assay
  • 12:39PAGE Analysis
  • 14:41Representative Results
  • 18:29Conclusion

Summary

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Qui, presentiamo la procedura dettagliata di una piattaforma di analisi sviluppata di recente proteasi che utilizza N-terminale hexahistidine/maltosio-proteina e substrati ricombinante fusi con proteine fluorescenti attaccati alla superficie di nichel-nitrilotriacetico acido dell'agarosi magnetico perline. Una successiva analisi in gel dei campioni test separati da elettroforesi dodecilica del gel del solfato-poliacrilammide di sodio inoltre è presentata.

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