This content is Free Access.
Chapters
- 00:04Title
- 01:45Positive and Negative Screening for Evolving Cas9
- 04:47Delivery of Cas9 as an RNP with Truncated sgRNA
- 06:17RNP Delivery
- 07:27Transfection of Plasmids Encoding Sniper-Cas9 and sgRNA
- 09:01Targeted Deep Sequencing for the Analysis of On-target and Potential Off-target Sites
- 09:29Results: Analysis of Sniper-screen, On-target and Off-target Activities
- 10:37Conclusion
Vi præsenterer her, en protokol for at optimere CRISPR-Cas9 for at opnå en højere specificitet uden tab af målaktivitet. Vi bruger en styret evolution tilgang kaldet Sniper-skærmen til at finde en mutant Cas9 med de ønskede egenskaber. Sniper-Cas9 er kompatibel med afkortede single-guide RNA'er og levering i et ribonucleoprotein format, velkendte strategier for at opnå højere specificiteter.
