Journal
/
유전학
/
Met behulp van Sniper-Cas9 te minimaliseren Off-target effecten van CRISPR-Cas9 zonder verlies van On-target activiteit Via gerichte evolutie
JoVE 신문
유전학
This content is Free Access.
JoVE 신문 유전학
Using Sniper-Cas9 to Minimize Off-target Effects of CRISPR-Cas9 Without the Loss of On-target Activity Via Directed Evolution
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.

Met behulp van Sniper-Cas9 te minimaliseren Off-target effecten van CRISPR-Cas9 zonder verlies van On-target activiteit Via gerichte evolutie

DOI:
10.3791/59202-v

•

11:37 min

•

February 26, 2019

•

, , ,
1ToolGen

Chapters

  • 00:04Title
  • 01:45Positive and Negative Screening for Evolving Cas9
  • 04:47Delivery of Cas9 as an RNP with Truncated sgRNA
  • 06:17RNP Delivery
  • 07:27Transfection of Plasmids Encoding Sniper-Cas9 and sgRNA
  • 09:01Targeted Deep Sequencing for the Analysis of On-target and Potential Off-target Sites
  • 09:29Results: Analysis of Sniper-screen, On-target and Off-target Activities
  • 10:37Conclusion

Summary

자동 번역

자동 번역

Hier presenteren we een protocol voor het optimaliseren van CRISPR-Cas9 om een hogere specificiteit zonder verlies van aan-target activiteit. We een gerichte evolutie aanpak genoemd Sniper-scherm gebruiken om te zoeken een mutant Cas9 met de gewenste kenmerken. Sniper-Cas9 compatible met afgekapte single-gids RNAs en levering in een ribonucleoprotein formaat, bekende strategieën voor het bereiken van hogere specificiteit.

Tags

Keywords: CRISPR-Cas9Off-target EffectsDirected EvolutionSniper-Cas9On-target ActivitySpecificityLibrary ScreeningTherapeutic DevelopmentCas9 VariantsY-type Cas9ElectroporationCompetent Cells

Article

Embed

플레이리스트에 추가

Usage Statistics

Related Videos

check_url/kr/59202?article_type=v

Procedure voor Adaptive Laboratorium Evolutie van micro-organismen met behulp van een Chemostat
check_url/kr/59202?article_type=v

CRISPR/Cas9-gemedieerde gerichte integratie In Vivo met behulp van een homologie-gemedieerde einde deelname aan gebaseerde strategie
check_url/kr/59202?article_type=v

CRISPR/Cas9 Gene bewerken te maken voorwaardelijke mutanten van menselijke malariaparasiet P. falciparum
check_url/kr/59202?article_type=v

Endogene eiwit Tagging in mens geïnduceerde pluripotente stamcellen met behulp van CRISPR/Cas9
check_url/kr/59202?article_type=v

SCHERPEr/Cas9 Ribonucleoproteã-gemedieerde nauwkeurige Gene bewerking door buis Electroporation
check_url/kr/59202?article_type=v

Introductie van een gen knock-out direct in het Amastigote stadium van Trypanosoma cruzi met behulp van het crispr/Cas9 systeem
check_url/kr/59202?article_type=v

Generatie van gedefinieerde genomische modificaties met CRISPR CAS9 in menselijke pluripotente stamcellen
check_url/kr/59202?article_type=v

Onderzoek naar de transcriptionele rol van een RUNX1 Intronic geluiddemper door crispr/Cas9 Ribonucleoprotein in acute myeloïde leukemie cellen
check_url/kr/59202?article_type=v

Celoppervlakreceptoridentificatie met genoomschaal CRISPR/Cas9 genetische schermen
check_url/kr/59202?article_type=v

In Vitro Gerichte Evolutie van een beperking Endonuclease met strengere specificiteit

Read Article