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Chapters
- 00:04Title
- 01:45Positive and Negative Screening for Evolving Cas9
- 04:47Delivery of Cas9 as an RNP with Truncated sgRNA
- 06:17RNP Delivery
- 07:27Transfection of Plasmids Encoding Sniper-Cas9 and sgRNA
- 09:01Targeted Deep Sequencing for the Analysis of On-target and Potential Off-target Sites
- 09:29Results: Analysis of Sniper-screen, On-target and Off-target Activities
- 10:37Conclusion
यहां, हम एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करने के लिए अनुकूलन crispr-Cas9 पर लक्ष्य गतिविधि के नुकसान के बिना एक उच्च विशिष्टता प्राप्त करने के लिए । हम वांछित विशेषताओं के साथ एक उत्परिवर्ती Cas9 खोजने के लिए स्नाइपर स्क्रीन कहा जाता है एक निर्देशित विकास दृष्टिकोण का उपयोग करें । स्निपर-Cas9 एक ribonucleopप्रोटीन प्रारूप में छोटा एकल गाइड rnas और प्रसव के साथ संगत है, उच्च विशेषज्ञता प्राप्त करने के लिए अच्छी तरह से ज्ञात रणनीतियों ।
