This content is Free Access.
Chapters
- 00:04Title
- 01:45Positive and Negative Screening for Evolving Cas9
- 04:47Delivery of Cas9 as an RNP with Truncated sgRNA
- 06:17RNP Delivery
- 07:27Transfection of Plasmids Encoding Sniper-Cas9 and sgRNA
- 09:01Targeted Deep Sequencing for the Analysis of On-target and Potential Off-target Sites
- 09:29Results: Analysis of Sniper-screen, On-target and Off-target Activities
- 10:37Conclusion
Her presenterer vi en protokoll for å optimalisere CRISPR-Cas9 for å oppnå en høyere spesifisitet uten tap av på målet aktivitet. Vi bruker en rettet utviklingen tilnærming kalt Sniper-skjermen for å finne en mutant Cas9 med de ønskede egenskapene. Sniper-Cas9 er kompatibel med avkortede single-guide RNAs og levering i et ribonucleoprotein format, kjente strategier for å oppnå høyere særegenheter.
